[發(fā)明專利]一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910965551.4
• 申請日: 2019-10-03
• 公開（公告）號: CN110819711A
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊建凱;孫國柱;扈玉華;焦保華
• 申請（專利權(quán)）人: 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，其具體方法如下：

(1)臨床獲取患者的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)用于提取其內(nèi)外泌體，將腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用細(xì)胞分散劑分散，并且采用振蕩設(shè)備將細(xì)胞分散均一，然后采用平板法測定細(xì)胞含量；

(2)將分散均勻的腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，并供應(yīng)新鮮的空氣；

(3)分離提取腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體，用紫外分光光度計對患者的腫瘤細(xì)胞來源外泌體進(jìn)行定量；

(4)將上述步驟中分離提取腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體后剩下的上清液采用熒光定量PCR方法測量FAM83H-AS1、XIST、MALAT1、UCA1的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，所述步驟(1)中細(xì)胞分散劑的原料包括離子螯合劑、膠原酶和胰蛋白酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，所述離子螯合劑濃度為0.02-0.04％、膠原酶濃度為0.1-0.3％和胰蛋白酶濃度為0.2-0.4％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，所述步驟(2)中，向培養(yǎng)基按重量百分?jǐn)?shù)計加入以下組份的混合物：脂聯(lián)素5-15％、TGF-β 130-50％、IGF-1 10-30％、LIF 20-40％。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，所述步驟(2)中的培養(yǎng)時間80-100個小時，培養(yǎng)條件為37℃，5％CO₂濕潤培養(yǎng)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的腦膠質(zhì)瘤外泌體內(nèi)非編碼RNA用于診斷預(yù)后的應(yīng)用方法，其特征在于，所述步驟(3)中腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞外泌體，具體提取方法如下：

a、混合液經(jīng)1600-1800r/min離心18-20min后，再經(jīng)0.22μm乙酸纖維素膜過濾，去除細(xì)胞碎片，得到無細(xì)胞濾液；

b、將上清轉(zhuǎn)移至另一干凈的滅菌管中，加入適量的ExoQuick試劑，上下顛倒離心管，混勻，3-5℃孵育過夜10-12h，1500-1600r/min離心28-30min，管底可見沉淀，去除上清液備用，1500-1600r/min繼續(xù)離心6-8min，小心去除上層液體組分備用；用100μ Lbuffer重懸沉淀；

c、用紫外分光光度計對患者的腫瘤細(xì)胞來源外泌體進(jìn)行定量。