[發明專利]一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法

有效

• 申請號: 201910964205.4
• 申請日: 2019-10-11
• 公開（公告）號: CN110628699B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 邢曉俠;吳思凡;崔杰峰;張希
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬中山醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 于曉菁

1.一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

1)將鼠尾I型膠原和DMEM基礎培養基分別按不同體積比混合，置于第一多孔板中，所述的鼠尾I型膠原的終濃度范圍在170-1790ug/mL之間；

2)將鼠尾I型膠原、DMEM基礎培養液及LOXL2過表達肝癌細胞無血清培養上清CM-LV-LOXL2-OE按1：10：5體積比混合，置于第二多孔板中；

3)將步驟1）和2）的上述第一多孔板和第二多孔板放入 37℃溫箱靜置1~2小時；

4)將步驟3）成膠后的基底置于4℃冰箱中10~14h，形成不同基底硬度體外細胞培養平臺。

2.根據權利要求1所述的一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法，其特征在于：步驟1）中，所述的鼠尾I型膠原和DMEM基礎培養基分別按1：1，1：2，1：3，1：4，1：15或者1：20系列體積比混合，置于第一多孔板中。

3.根據權利要求1所述的一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法，其特征在于：步驟2）中，所述的鼠尾I型膠原的終濃度為223.75ug/mL；所述的LOXL2的終濃度為96.875ng/mL。

4.根據權利要求1所述的一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法，其特征在于：可以采用物性測試儀對步驟4）每孔所成凝膠硬度進行檢測，檢測所設參數為：Pre-TestSpeed:1.00mm/sec；Test Speed:0.50 mm/sec；Target Mode: Strain； Strain:90%；Trigger Force:1.0/2.0g。

5.根據權利要求1所述的一種肺硬度基底體外細胞培養平臺的制備方法，其特征在于：所述的CM-LV-LOXL2-OE的制備方法如下：采用慢病毒介導過表達技術形成慢病毒包裝LOXL2過表達質粒，感染肝癌細胞MHCC97H，先以含3 ug/mL嘌呤霉素、體積百分比濃度10%的FBS和體積百分比濃度1%的青鏈霉素的DMEM培養液進行感染細胞陽性篩選，至細胞無明顯死亡，再用含體積百分比濃度10% FBS和體積百分比濃度為1%青鏈霉素的DMEM換液培養，細胞生長至85~95%密度，收集細胞確定LOXL2過表達程度，隨后將85~95%密度LOXL2過表達肝癌細胞以DMEM無血清培養液培養24小時，收取培養上清，獲得CM-LV-LOXL2-OE，離心后分裝凍存。