[發明專利]一種深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體制備方法

有效

• 申請號: 201910963913.6
• 申請日: 2019-10-11
• 公開（公告）號: CN110577902B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 吳艷清;白菁華;劉文靜;趙茹茹;張士薇;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 保定學院;保定市稀成生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 石家莊中和昇知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 13145
• 代理人: 付會平

本發明公開了一種深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體制備方法，具體包括：植物根系的選取與處理、制備培養體系、菌種的分離培養、菌種的純化培養、制備菌種種子溶液及其發酵培養、制備干粉菌劑以及制備深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體的步驟。本發明制備的深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體具有菌劑組合質量好、侵染率高、定殖率高、保質期長、侵染效果穩定的優點，本制備方法可廣泛應用于科研、生態防治、土壤改良和恢復等領域，實現大規模工廠化運作、滿足產業要求。

技術領域

本發明涉及微生物菌劑技術領域，更具體涉及一種深色有隔內生菌根真菌菌劑。

背景技術

深色有隔內生菌根，是自然界中廣泛存在的一種植物根系與真菌的共生體。深色有隔內生菌根真菌(Dark Septate Endiphytes，DSE)是一類可以定殖在植物根系內的小型土壤真菌，并與植物根系形成菌根結構。DSE主要分布在極端環境中，如重金屬污染區域、荒漠地區、高寒地區和極地等，具有菌根生態學的功能，不僅可以增強植物對生物和非生物因素的抗壓能力，幫助植物在干旱環境中維持水分和營養運輸，而且能夠通過提高植物體內某些酶類的活性來增強植物的抗逆性，促進植物生長，在恢復荒漠化土地和修復重金屬污染土壤等方面具有重要意義。

當前，由于DSE的活體營養、專性共生、生長史中不出現產孢現象等特點，使得采用大批量高效生產的方法來獲取高質量的菌劑過程非常復雜。現階段在DSE純培養方面的主要研究成果有：張海涵等的《黃土高原枸杞根際微生態特征及其共生真菌調控宿主生長與耐旱響應機制》的研究結果表明，不同DSE菌株生長的最適碳源和氮源不同，Phomachrysanthemicola為葡萄糖和甘氨酸，Cladosporium cladosporioides LBF3為甘露醇和脯氨酸，Cladosporium cladosporioides LBF6為木糖和甘氨酸；班宜輝等的一項專利號為CN105918127 B的一種基于DSE快速擴繁建立DSE-植物共生體系的方法的研究結果表明，G.Cylindrosporus生長的最適碳源、氮源、溫度和pH分別為葡萄糖、蛋白胨、25℃和5.0；徐鳳美等的《松萎蔫病發生區和未發生區油松根部真菌研究》的研究結果表明，DSE菌株Phialocephala fortinii在固體培養時最適碳源和氮源分別為乳糖和麥芽浸粉，而液體培養時最適碳源和氮源分別為可溶性淀粉和蛋白胨，其生長最適溫度和pH分別為20℃和3.0。現階段在DSE對宿主植物侵染率方面的主要研究成果有：王少杰等的《蒙古沙冬青DSE資源分布及接種效應研究的研究》結果表明，DSE在蒙古沙冬青根系中的平均定殖率為52.02％；葛佳麗等的《極旱荒漠植物深色有隔內生真菌定殖及其與土壤因子的相關性》的研究結果表明，DSE在紅砂和膜果麻黃根系中的平均定殖率分別為13％和66.7％。這些生產方法都沒有形成系統框架，無法實現大規模工廠化運作，生產得到的菌劑侵染效果在植物生產系統中的表現也較為不穩定，所以不能滿足產業需求。

發明內容

本發明需要解決的技術問題是提供一種深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體的制備方法，以解決目前深色有隔內生菌根生產方法沒有形成系統構架、無法實現大規模工廠化運作以及制得的菌劑侵染效果不穩定的問題；進一步達到菌劑制備低成本、無污染、原料利用率高、菌劑侵染率高、延長菌劑保質期的目的，實現深色有隔內生菌根的工廠化運作。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體制備方法。

一種深色有隔內生菌根真菌菌劑組合體制備方法，具體制備方法如下：

S1：選取野生一年生須根草本植物，將其根系洗凈、切段和消毒；

S2：制備馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養體系、馬鈴薯葡萄糖液體培養體系和馬鈴薯葡萄糖瓊脂雙抗固體培養體系；

S3：將S1處理的根系接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂雙抗固體培養體系上進行菌種分離培養；

S4：挑取成熟菌絲接種到馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養體系上進行菌種純化培養；

S5：制備菌種種子液；