[發明專利]一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用

在審

• 申請號: 201910963896.6
• 申請日: 2019-10-11
• 公開（公告）號: CN111187727A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 唐少然;安航;唐滿倉;安德榮;馬玉明
• 申請（專利權）人: 陜西恒田生物農業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明所述的一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW?6的菌液制備及應用，本發明選取的甲基營養型芽孢桿菌菌株來源保藏機構為：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的甲基營養型芽孢桿菌，保藏登記號為：CGMCCNo.6793，本發明菌劑的制備是在特定的發酵培養基和工藝條件下，主要包括:原種篩選??確定出發菌株—制備液體種子液??放大發酵—超濾濃縮??制備200億活孢子菌液/ml,本發明所述的甲基營養型芽孢桿菌LW?6對營養要求低，抗逆性強，生長繁殖快，具有定值和競爭能力強，殺菌效果明顯。本發明具有防治棉花枯黃萎病的功能，用浸種處理和滴灌處理防治黃萎病防效可達81.2%，枯萎病防效可達81.0%。本發明中的甲基營養型芽孢桿菌LW?6作為棉花枯黃萎病的生物防治菌劑，從源頭上斷絕環境污染以及化學農藥殘留，且具有更好的防治效果。因此本發明在新的生物農藥研發方面和應用方面都具有廣闊的理論和時間意義。

技術領域

本發明涉及一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用，屬于微生物技術領域或者生物防治技術領域。

背景技術

棉花枯黃萎病是世界性的重要病害之一，自1935年由引進美國斯字棉種而傳入中國，并逐年傳播擴散。目前枯黃萎病的危害已成為棉花生產上的第一大病害，該病害屬于土壤帶菌和傳播的根部病害，防治困難，其發生嚴重影響棉花的產量和質量，是棉花可持續生產的主要障礙之一。目前，國內外有兩種主流防治該病的方法，一是主要依靠種植耐病品種，但由于抗性種質資源缺乏導致抗病育種進展緩慢，生產上缺乏真正有效的抗病品種；二是化學防治，但是化學防治措施控制該病的效果甚微，此方法同時帶來嚴重的環境污染和化學農藥殘留。

對此，本發明一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6菌液是以生物防治的方式來防治棉花枯黃萎病，并且結合滴灌再補充水肥的條件下加入有益微生物甲基營養型芽孢桿菌LW-6進行該病害的防治，本發明相比化學藥劑和種植耐病品種的方式，都具有不同的優勢，另一方面本發明的生防菌劑對環境無污染，也不會產生抗藥性。

發明內容

本發明針對現有技術的不足，提供一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用。該菌液制備工藝獨特，包括原種篩選--確定出發菌株—制備液體種子液--放大發酵—超濾濃縮,該菌液含有的甲基營養型芽孢桿菌LW-6活孢子數高，可達200億/ml，具有對棉花枯黃萎病更加高效的生物防治功能，用滴灌處理防治黃萎病防效可達81.2％，枯萎病防效可達81.0％。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

采用如下方法制備：一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用:

(1)將甲基營養型芽孢桿菌LW-6原種接種于瓊脂淀粉平板培養基上，35℃下培養72h，顯微鏡下檢測，選擇中央芽孢形成均一，兩端著色清晰的大菌落作為發酵出發菌落；

(2)將所述步驟(1)所述的發酵出發菌落接種于液體種子培養基，裝液量為：500ml的搖瓶裝100ml種子液，培養溫度35℃，轉速200rpm條件下培養72h，得到發酵種子液；

(3)將步驟(2)得到的發酵種子液，按照9％的接種量接入發酵培養基，在發酵罐中進行發酵培養，培養條件為：罐壓0.07Mpa，風量1:0.8vvm，轉速260rpm，培養溫度為35℃，直到發酵罐中發酵液中的活孢子數達200億/ml以上、芽孢量大于或等于92 ％時即可終止發酵。

(4)將步驟(3)得到的發酵液進行超濾濃縮,去掉40％水分，其特征為：：串聯使用孔徑分別為0.005um、0.001um和1nm的3個超濾膜組件，將發酵液在35℃、壓力0.3MPa條件下依次同時進行連續超濾處理，超濾時間4h,得到一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6液體菌劑,活孢子數≥200億/ml.