[發明專利]一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用

在審

• 申請號: 201910963896.6
• 申請日: 2019-10-11
• 公開（公告）號: CN111187727A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 唐少然;安航;唐滿倉;安德榮;馬玉明
• 申請（專利權）人: 陜西恒田生物農業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/07
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6的菌液制備及應用,

其特征在于采用如下方法制備 ：

（1）將甲基營養型芽孢桿菌LW-6原種接種于瓊脂淀粉平板培養基上，35℃下培養 72h，顯微鏡下檢測，選擇中央芽孢形成均一，兩端著色清晰的大菌落作為發酵出發菌落；

（2）將所述步驟(1)所述的發酵出發菌落接種于液體種子培養基，裝液量為 ：500ml的搖瓶裝 100ml 種子液，培養溫度 35℃，轉速 200rpm 條件下培養 72h，得到發酵種子液 ；

（3）將步驟 (2) 得到的發酵種子液，按照 9％的接種量接入發酵培養基，在發酵罐中進行發酵培養，培養條件為 ：罐壓 0.07Mpa，風量 1:0.8vvm，轉速260rpm，培養溫度為 35℃， 直到發酵罐中發酵液中的活孢子數達200億/ml 以上、芽孢量大于或等于 92％時即可終止發酵，

(4) 將步驟(3)得到的發酵液進行超濾濃縮,去掉40%水分，其特征為：：串聯使用孔徑分別為0.005um、0.001um和1nm的3個超濾膜組件，將發酵液在35℃、壓力0.3MPa條件下依次同時進行連續超濾處理，超濾時間4h, 得到一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6液體菌劑,活孢子數≥200億/ml。

2. 如權利要求 1所述的甲基營養型芽孢桿菌LW-6菌液，其特征在于，所述步驟（1）中的甲基營養型芽孢桿菌保藏登記號為：CGMCCNo.6793，保藏機構為 ：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的甲基營養型芽孢桿菌。

3. 如權利要求 1 所述的甲基營養型芽孢桿菌液，其特征在于，所述步驟（1）中的瓊脂淀粉平板培養基組分如下，均為重量百分比 ：瓊脂15%，淀粉7%，酵母浸粉 1.8%，蛋白胨01.3%，硫酸鎂0.1%,碳酸鈉0.2%，氯化鈉 0.8%，余量為水，pH7.2～ 7.3。

4. 如權利要求 1 所述的甲基營養型芽孢桿菌菌液，其特征在于，所述步驟（2）中液體種子培養基組分如下，均為重量百分比 ：蛋白胨1.0%，葡萄糖 2.6％，酵母浸膏 1.3％，NaCl 0.8％，硫酸鎂0.1%,碳酸鈉0.2%，余量為水，PH7.0～7.1。

5.如權利要求1所述的甲基營養型芽孢桿菌菌液，其特征在于，所述步驟（3）中發酵培養基的組成成分及重量百分比為：玉米漿 0.7％，玉米淀粉 0.2％，麩皮粉1.4％，葡萄糖0.8％，酵母浸膏 0.5％，蛋白胨 0.2％，KH2PO4 0.005 ％，(NH4)2SO4 0.009 ％，MnSO40.006 ％，CaCO3 0.007 ％， MgSO4.7H2 0.008％，硫酸鎂0.1%,碳酸鈉0.2%，余量為水，pH7.4～ 7.5。

6.權利要求 1 所述的是一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6菌液的制備及應用。

7.如權利要求 6 所述的應用，其特征在于，步驟如下 ：

將一種用于棉花枯黃萎病生物防治的甲基營養型芽孢桿菌LW-6液體菌劑在播種前做好浸種處理（3h），待棉花出苗2個月，與水1：800混合4小時后（充分混合并通過200目濾網過濾后），進行滴灌，每隔7天重復一次，共計處理3次。