[發明專利]一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備及應用

在審

• 申請號: 201910960027.8
• 申請日: 2019-10-10
• 公開（公告）號: CN110760553A
• 公開（公告）日: 2020-02-07
• 發明（設計）人: 楊最素
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 33109 杭州杭誠專利事務所有限公司
• 代理人: 尉偉敏

1.一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，包括以下步驟：

（1）、安康魚肉預處理：將安康魚進行解凍清洗后絞碎，在料液比為1:4-6 (m/v)，溫度為48-52℃的條件下，用94-96%的乙醇水浴脫脂2-2.2h；脫脂后將上清液倒掉，用純水將沉淀洗凈，將脫脂魚肉在2-6 ℃、11900-12000 r/min 條件下離心15-20 min，收集沉淀，放入-18—-20 ℃冷凍備用；

（2）、酶解：將魚肉加到含有中性蛋白酶的酶解液中進行酶解；其中，中性蛋白酶的濃度為0.05-0.25wt%，酶解液質量為魚肉質量的2-4倍，酶解溫度為30-45℃，酶解液pH至控制在6.5-8.5，酶解時間為5-5.4h；

（3）、過濾得澄清液：向酶解液中添加質量為酶解液1-2wt%的改性活性炭，并將酶解液加熱到70-80℃，脫色30-50min；將脫色后的酶解液轉移至板框過濾池內進行過濾，取澄清液；

（4）、分離純化：將澄清液鼓氣起泡，并收集泡沫液，在鼓氣的同時注水；鼓氣速率為3-4L/min，注水速率為0.2-0.3L/min，澄清液溫度保持在25-35℃；待收集的泡沫液滅泡后，對泡沫液進行重金屬分離；向重金屬分離后的泡沫液中添加質量為泡沫液1-2%的磁性親和微球并分散均勻，靜置親和吸附50-70min后利用磁場使磁性親和微球聚集；分離出磁性親和微球后，用pH值為7-7.2的Tris-HCl緩沖液對磁性親和微球進行洗脫，再次利用磁場分離出磁性親和微球后，得到洗脫液，75-85℃下儲存備用；

（5）、除雜除菌：將洗脫液通過二級0.22微米膜過濾除雜除菌；其中膜過濾溫度小于45℃，一級過濾壓力小于0.25MPa，二級過濾壓力小于0.4MPa；

（6）、多肽分級：采用超濾膜或納濾膜對膜過濾后的濃縮液按分子量進行分離，得到目標分子量的安康魚肉多肽。

2.根據權利要求1所述的一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，所述改性活性炭的制備步驟為：

a、預處理：對果殼活性炭，先用0.5-0.8mol/L 稀硝酸于60-65 ℃ 浸泡活性炭1.8-2.2h，將樣品過濾后再緩慢加入0.8-1mol/L的氫氟酸，于60-70 ℃ 浸泡8-10 h 后用去離子水洗滌至中性，后加入去離子水98-100℃煮沸1.8-2.2 h，之后用純水沖洗2-3次后，置于98-102℃烘箱中烘干，取出后進行密封處理備用；

b、改性：稱取預處理后的果殼活性炭，分別用10-15%的碳酸氫鈉浸泡并磁力攪拌1.8-2.2 h，再用去離子水將上述果殼活性炭沖洗至pH值達到6.8-7為止，然后在98-102℃恒溫干燥箱中干燥22-24 h，即可得到改性后的果殼活性炭。

3.根據權利要求2所述的一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，所述果殼為杏仁果殼。

4.根據權利要求2所述的一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，步驟b所述的果殼活性炭與碳酸氫鈉的質量比為1:3-4。

5.根據權利要求1所述的一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，所述磁性親和微球的制備步驟如下：

I、生成磁性微球：將海藻酸鈉、聚環氧乙烷、脫乙酰甲殼素、正庚烷、乙酸和純水按質量比2-3:1-1.2:2-2.5:0.5-0.8:3-5:100混合溶解，攪拌均勻后制得混合液A；向混合液A中添加混合液A質量4-6%的四氧化三鐵磁顆粒并分散均勻，得到混合液B；對混合液B進行超聲波分散，同時向混合液B中勻速滴加混合液B質量40-60%的乳化液，得到混合液C；先后向混合液C中添加混合液C質量0.1-0.2%的97-98wt%的戊二醛和混合液C質量0.5-0.8倍的2.5-3.5wt%的溴化鉀溶液，充分攪拌，靜置1-1.2h，生成磁性微球；

II、聚集磁性微球：利用磁場對液體中磁性微球進行聚集，取出磁性微球后進行清洗、干燥。

6.根據權利要求5所述的一種具有修復作用的安康魚肉多肽的制備，其特征是，步驟I所述乳化液為體積占比為30-35%的雙乙酰酒石酸單甘油酯-80無水乙醇混合液，乳化液在5-10min內滴加完畢。