[發明專利]惡臭假單胞菌KT2440蛋白同源表達載體的構建及表達、純化方法在審
| 申請號： | 201910955769.1 | 申請日： | 2019-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN110592132A | 公開（公告）日： | 2019-12-20 |
| 發明（設計）人： | 崔格特 | 申請（專利權）人： | 武漢博歐特生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/78 | 分類號： | C12N15/78;C12N15/31;C07K14/21;C07K1/22 |
| 代理公司： | 42247 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 張文俊 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖開發區高新大道*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表達載體 目的蛋白 惡臭假單胞菌 構建 蛋白 蛋白表達載體 目的蛋白基因 親和層析純化 蛋白酶 異源表達 誘導表達 同源 切除 轉入 | ||
1.一種惡臭假單胞菌KT2440蛋白同源表達載體的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、合成編碼10×His及Thrombin蛋白酶識別位點的序列，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，并構建表達載體pVLT33-10×His；
S2、擴增目的蛋白X的基因x，將基因x連接到表達載體pVLT33-10×His上，得到表達載體pVLT33-10×His-x。
2.如權利要求1所述的惡臭假單胞菌KT2440蛋白同源表達載體的構建方法，其特征在于：步驟S1中，在構建所述表達載體pVLT33-10×His過程中，在編碼10×His及Thrombin蛋白酶識別位點的序列上帶上翻譯起始密碼子序列ATG。
3.如權利要求1所述的惡臭假單胞菌KT2440蛋白同源表達載體的構建方法，其特征在于：所述表達載體pVLT33-10×His的完整核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。
4.如權利要求1所述的惡臭假單胞菌KT2440蛋白同源表達載體的構建方法，其特征在于：所述表達載體pVLT33-10×His中在編碼10×His及Thrombin蛋白酶識別位點的序列的下游有多克隆位點。
5.一種惡臭假單胞菌KT2440蛋白的表達方法，其特征在于：將采用權利要求1-4任一所述方法制備的表達載體pVLT33-10×His-x轉入惡臭假單胞菌KT2440中誘導表達，得到融合蛋白10×His-X。
6.一種惡臭假單胞菌KT2440蛋白的純化方法，其特征在于：將權利要求5得到的融合蛋白10×His-X利用Ni離子親和層析柱進行純化，然后用凝血酶切除10×His標簽，得到純目的蛋白X。
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