[發明專利]色氨酸2,3雙加氧酶突變體及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201910955751.1 | 申請日： | 2019-10-09 |
| 公開（公告）號： | CN110628736B | 公開（公告）日： | 2021-05-11 |
| 發明（設計）人： | 王喜慶;魏研欣;蔣勝勝 | 申請（專利權）人： | 揚州大學 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224 | 代理人： | 王玉 |
| 地址： | 225009 *** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 色氨酸 雙加氧酶 突變體 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種色氨酸2,3雙加氧酶突變體，其特征是，該突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.編碼如權利要求1所述色氨酸2,3雙加氧酶突變體的核苷酸序列，其特征是，所述核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.包含如權利要求2所述色氨酸2,3雙加氧酶突變體的核苷酸序列的載體。
4.表達權利要求1所述色氨酸2,3雙加氧酶突變體的細胞，包含權利要求3所述的載體。
5.根據權利要求1所述的一種色氨酸2,3雙加氧酶突變體的制備方法，其特征是，包括：
將色氨酸2,3雙加氧酶第51位的氨基酸殘基苯丙氨酸替換為甲硫氨酸，將第127位的氨基酸殘基谷氨酰胺替換為酪氨酸，獲得如權利要求1所述的色氨酸2,3雙加氧酶突變體；
將構建的表達色氨酸2,3雙加氧酶突變體的質粒轉化到大腸桿菌中；
色氨酸2,3雙加氧酶突變體的表達及純化。
6.一種生產3a-羥基六氫吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的方法，其特征是，以色氨酸、5-氯色氨酸、6-氯色氨酸為底物，加入過氧化氫酶、亞甲基藍、抗壞血酸和反應緩沖液，利用權利要求1所述的色氨酸2,3雙加氧酶突變體為催化劑進行催化反應。
7.根據權利要求6所述的一種生產3a-羥基六氫吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的方法，其特征是，反應體系的pH為6.0，反應溫度為25℃，反應時間為24 h。
8.權利要求1所述的色氨酸2,3雙加氧酶突變體在制備含3a-羥基六氫吡咯[2,3-b]吲哚-2-羧酸的產品方面的應用。
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