[發(fā)明專利]一種聯(lián)合定量檢測CRP與SAA的時(shí)間分辨熒光免疫層析試劑盒及制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910954368.4
• 申請日: 2019-10-09
• 公開（公告）號(hào): CN110609025A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱傳增;李金偉;石曉強(qiáng);吉海
• 申請（專利權(quán)）人: 上海奧普生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64;G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 31211 上海浦一知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 鄭權(quán)

1.一種聯(lián)合定量檢測CRP及SAA的時(shí)間分辨熒光免疫層析試劑盒，包括：熒光免疫層析試劑板、樣本稀釋液和血液采樣裝置；其特征在于，

所述熒光免疫層析試劑板包含樣品墊、熒光墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述熒光墊包被有綴合配對抗SAA單抗1的熒光微球、綴合配對抗CRP單抗1的熒光微球、和綴合羊抗兔抗體的熒光微球；所述熒光微球?yàn)榱?00±50nm的時(shí)間分辨熒光微球；所述硝酸纖維素膜上設(shè)有一條包被有抗CRP單抗2的CRP檢測線、一條包被有抗SAA單抗2的SAA檢測線和一條包被有兔抗體的質(zhì)控線；

所述樣本稀釋液為含有0.01wt％-0.5wt％表面活性劑的Tris-HCl緩沖液；

所述熒光墊中，綴合配對抗SAA單抗1的熒光微球的終濃度為0.1-1mg/mL，綴合配對抗CRP單抗1的熒光微球的終濃度為0.1-1mg/mL，綴合羊抗兔抗體的熒光微球的終濃度為0.1-1mg/mL；

所述硝酸纖維素膜上，抗CRP單抗2的終濃度為0.5-2.0mg/mL，抗SAA單抗2的終濃度為0.5-2.0mg/mL，兔抗體的終濃度為0.5-2.0mg/mL；

所述抗SAA單抗1與抗SAA單抗2分別特異性結(jié)合SAA的不同抗原表位，所述抗CRP單抗1與抗CRP單抗2分別特異性結(jié)合CRP的不同抗原表位。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述熒光墊中，熒光微球的稀釋液為包含0.1-10mg/mL BSA或Casein、1wt％-30wt％蔗糖及海藻糖、0.01wt％-0.5wt％表面活性劑的MES緩沖液。

3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述血液采樣裝置用于血液樣品的采集和轉(zhuǎn)移。

4.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述樣本稀釋液中表面活性劑選自吐溫20、吐溫80、S9、BrijL23、曲拉通100、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。

5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述樣品墊及熒光墊的處理液配方為含0.1-10mg/mL BSA或Casein、0.01wt％-0.5wt％的表面活性劑的Tris-HCl緩沖液，所述表面活性劑選自吐溫20、吐溫80、S9、BrijL23、曲拉通100、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一種。

6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述綴合配對是指熒光微球與識(shí)別目標(biāo)蛋白的特定位點(diǎn)通過氫鍵形成復(fù)合物。

7.一種聯(lián)合定量檢測CRP及SAA的時(shí)間分辨熒光免疫層析試劑盒的制備方法，所述方法包括如下步驟：

熒光免疫層析試劑板的制備：在底板中間粘貼硝酸纖維素膜，在硝酸纖維素膜的一端貼上吸水墊，另一端貼上熒光墊；熒光墊的一端壓住硝酸纖維素膜，熒光墊的另一端貼上樣品墊，且樣品墊壓住熒光墊；切條，安裝到卡殼；

其中，

1)熒光墊的制備：在MES緩沖液中加入濃度0.01-0.1mg/mL羊抗兔抗體熒光微球綴合物、終濃度0.1-1mg/mL抗SAA單抗1熒光微球綴合物、終濃度0.1-1mg/mL抗CRP單抗1熒光微球綴合物、1-10mg/mL表面活性劑制備得到熒光微球抗體綴合物混合物；將所述熒光微球抗體綴合物混合物均勻噴至玻璃纖維膜上，即得熒光墊；

2)硝酸纖維素膜的制備：將抗SAA單抗2、抗CRP單抗2、兔抗體分別用PH7.5-8.5的0.05-1.5M硼酸鹽緩沖液稀釋成0.5-2.0mg/mL，同時(shí)添加終濃度10-20mg/mL的蔗糖和終濃度0.1-0.5mg/mL的溴酚藍(lán)，即可分別配制得到抗SAA單抗2溶液、抗CRP單抗2溶液和兔抗體溶液；將所述抗SAA單抗2溶液、抗CRP單抗2溶液和兔抗體溶液分別噴在硝酸纖維素膜上形成三條平行線，分別為SAA檢測線、CRP檢測線和質(zhì)控線。