[發明專利]一種檢測喹乙醇的時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910948273.1
• 申請日: 2019-10-08
• 公開（公告）號: CN111060690B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發明（設計）人: 金仁耀;王賽賽;翟璐;郭建軍
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學;杭州佰昕科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/577;C07K16/44;G01N33/533
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

本發明公開了一種檢測喹乙醇的時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其應用，本發明的試劑盒具有較高的精密度和準確度，而且該試劑盒對喹乙醇有高度的特異性；該試劑盒能夠對水、飼料和魚肉組織中的喹乙醇進行定性和定量檢測，樣品預處理過程簡單，方便快捷，檢測準確度高。

技術領域

本發明屬于生物技術中的時間分辨熒光免疫分析技術領域，具體涉及一種檢測喹乙醇的時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其應用。

背景技術

喹乙醇(?Olaquindox，OLA?)是一種抗菌促生長劑，曾廣泛應用于水產養殖，一度被稱為“水產瘦肉精”。喹乙醇的毒副作用不容小覷，存在明顯的遺傳毒性和蓄積毒性，因此國內外相繼制定了嚴格的使用規范和殘留限量標準。如美國和歐盟禁止使用喹乙醇，日本規定喹乙醇在動物組織和內臟中的最大殘留限量(?MRL?)為300μg·kg^-1，我國農業部在2001年發布的第168號公告《飼料藥物添加劑使用規范》中規定飼料中的添加量不得高于50mg·kg^-1，同時規定禁止在魚、禽及體重超過35kg豬的養殖過程中使用。盡管如此，抗菌促生長效果好且廉價的喹乙醇目前仍存在違規添加使用的現象。因此，加強喹乙醇的檢測監督，特別是加強喹乙醇檢測技術的研究極為必要。

喹乙醇的殘留檢測方法，主要包括傳統的儀器分析和免疫分析兩大類。其中儀器法主要包括光譜法、色譜法以及液質聯用技術等，儀器分析準確度高、精密度強，但其樣品前處理過程復雜繁瑣、耗時長、需要專業技術人員操作、儀器試劑等價格昂貴，無法在基層得到極大推廣。免疫分析技術憑借著其高效、快速、高靈敏度以及高特異性等優勢廣泛應用于小分子藥物殘留檢測中。

時間分辨熒光免疫分析技術(?TRFIA?)是近年來發展迅速的一種高靈敏度檢測手段。TRFIA的原理是利用具有雙功能基團結構的螯合劑，其一端與鑭系元素結合，另一端則與抗體(或抗原)上的自由氨基連接，制成鑭系元素Eu³⁺標記抗體(或抗原)，它與待測樣品中的抗原(或抗體)結合生成抗原抗體復合物。此時免疫復合物的熒光強度非常弱，需加入一種增強液，使Eu³⁺從復合物中解離下來，在增強液中TOPO、Triton?X-100等的協同作用下可與另一種螯合劑TTA形成新的復合物，該復合物可發射出很強的熒光，使熒光效果增強上百萬倍。最后用時間分辨儀測定其熒光強度cps，即可確定樣品中抗原的含量。因此，研究一種配置簡單、性狀穩定、成本低廉、效果明顯的喹乙醇TRFIA檢測試劑盒是非常必要和有意義的。

發明內容

為了解決上述存在的問題，本發明提供了一種檢測喹乙醇的時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其應用。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測喹乙醇的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，包括以下組成：

（1）包被有1?μg·mL^-1抗原OLA-A-OVA的反應板；-A-表示-CH=CH-CH=CH-COO-；

抗原OLA-A-OVA為：，

（2）銪標記的喹乙醇單克隆抗體溶液：含0.5?ng·mL^-1的Eu³⁺-OLA-mAb，質量百分含量為1%BSA，質量百分含量為0.2%疊氮化鈉，基礎緩沖體系為0.01?mol·L^-1，pH=7.4的磷酸鹽緩沖液與等體積的甘油混合而成；

（3）喹乙醇標準品母液1?μg·mL^-1；

（4）反應增強液：含0.27?mmol·L^-1а-噻吩甲酰三氟丙酮，0.5?mmol·L^-1三辛基氧化膦，體積分數為0.05%無水乙醇，體積分數為5.9%冰乙酸，體積分數為0.25%的TritonX-100，6.8?mmol·L^-1的鄰苯二甲酸氫鉀，pH為3?.0，余量為去離子水；