[發明專利]基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法

有效

• 申請號: 201910946723.3
• 申請日: 2019-10-07
• 公開（公告）號: CN112697720B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 陳偉;何少斌;鄧豪華;彭花萍;莊權權
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

本發明公開一種基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法。肝素修飾鋨納米粒子加入汞離子之后，肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性被增敏和激活，能夠催化氧化3,3’,5,5’?四甲基聯苯胺鹽酸鹽生成藍色物質。而肝素酶能夠降解肝素，加入肝素酶，汞離子增敏肝素?鋨納米粒子催化氧化3,3’,5,5’?四甲基聯苯胺鹽酸鹽的藍色物質由深藍變為淺藍，紫外600?nm處的吸收值降低，建立顯色體系實現對肝素酶的檢測。該方法所得在肝素酶檢測的線性范圍為20?1000μg/L，檢測限為15μg/L。該檢測方法可以實現血清樣品中肝素酶的便捷分析，具有操作簡便、檢測時間短、靈敏度高、特異性強等優點，易于推廣使用。

技術領域

本發明開發基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，屬于分析化學和納米技術領域。

背景技術

肝素酶是由肝素黃桿菌產生的一種肝素降解酶，在外科手術和其他應用中，肝素酶可特異性地裂解肝素聚合物中存在的葡萄糖胺（1-4）醛酸糖苷鍵，從而使血液去肝素化。肝素酶降解肝素的作用促進了肝素的結構分析和污染檢測，并具有生產低分子量肝素的巨大潛力，生產途徑更加綠色高效。此外，肝素酶影響多種生物學過程，包括形態形成、炎癥、血管生成，腫瘤侵襲和轉移。然而，目前肝素酶的檢測方法較少，且存在如特異性和選擇性差，試劑不穩定，成本高和標準化困難等缺點，因此，建立新型高選擇性，低成本和方便快捷的肝素酶檢測技術具有重要的意義。

納米酶的發現，推動了納米科技的基礎研究也拓展了納米材料的應用。納米酶是一種具有酶類特征的納米材料。相比天然酶，納米酶具有成本低，穩定性高，經久耐用等優點，因其獨特優勢廣泛應用于生物醫學傳感、疾病診斷、治療，環境監測等領域。

基于上述背景，本發明利用肝素修飾鋨納米粒子氧化酶活性構建肝素酶檢測方法。本發明發現肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性相對較低，但加入汞離子之后，肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性被增敏和激活，具有廣泛的催化活性，能夠催化氧化3,?3’,?5,5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽生成藍色物質。而肝素酶能夠降解肝素，汞離子增敏后催化氧化3,3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽的藍色物質由深藍變為淺藍，紫外600?nm處的吸收值降低，基于上述現象，可建立顯色體系實現對肝素酶的檢測。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法。肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性相對較低，但加入汞離子之后，肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性被增敏和激活，具有廣泛的催化活性，能夠催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽生成藍色物質。而肝素酶能夠降解肝素，加入肝素酶，汞離子增敏肝素-鋨納米粒子催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽的藍色物質由深藍變為淺藍，紫外600nm處的吸收值降低，建立顯色體系實現對肝素酶的檢測。

為了實現上述檢測方法的目的，本發明采用以下技術方案：

一種基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是肝素修飾鋨納米粒子加入汞離子之后，肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性被增敏和激活，具有廣泛的催化活性，能夠催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽生成藍色物質，而肝素酶能夠降解肝素，加入肝素酶，汞離子增敏肝素-鋨納米粒子催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽的藍色物質由深藍變為淺藍，紫外600?nm處的吸收值降低，建立顯色體系實現對肝素酶的檢測。

所述的基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是能根據紫外吸收光譜的最大吸收波長600?nm處的吸收值以判斷肝素酶的濃度。

所使用的肝素修飾鋨納米粒子由下述方法制備的：將0.1?g的肝素與1?mL濃度為10?mM的六氯鋨酸鉀混合，再加入48?mL雙蒸水，避光條件下攪拌30分鐘，隨后加入1?mL濃度為0.2?M的硼氫化鈉，繼續攪拌90分鐘，溶液顏色由淺綠色變為淺棕色，制得50?mL濃度為38mg/L的肝素修飾鋨納米粒子。