[發明專利]基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法

有效

• 申請號: 201910946723.3
• 申請日: 2019-10-07
• 公開（公告）號: CN112697720B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 陳偉;何少斌;鄧豪華;彭花萍;莊權權
• 申請（專利權）人: 福建醫科大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是肝素修飾鋨納米粒子加入汞離子之后，肝素修飾鋨納米粒子的氧化酶活性被增敏和激活，具有廣泛的催化活性，能夠催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽生成藍色物質，而肝素酶能夠降解肝素，加入肝素酶，汞離子增敏肝素-鋨納米粒子催化氧化3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽的藍色物質由深藍變為淺藍，紫外600?nm處的吸收值降低，建立顯色體系實現對肝素酶的檢測；

所使用的肝素修飾鋨納米粒子由下述方法制備的：將0.1?g的肝素與1?mL濃度為10?mM的六氯鋨酸鉀混合，再加入48?mL雙蒸水，避光條件下攪拌30分鐘，隨后加入1?mL濃度為0.2M的硼氫化鈉，繼續攪拌90分鐘，溶液顏色由淺綠色變為淺棕色，制得50?mL濃度為38?mg/L的肝素修飾鋨納米粒子；

100?μL濃度為38?mg/L的肝素修飾鋨納米粒子與200?μL不同濃度的肝素酶在25?℃下混合15分鐘后加入0.4?mL，50?μM汞離子，在混合溶液中陸續加入3300?μL?pH=6，20?mM的磷酸鹽緩沖溶液和200?μL濃度為2?mM的3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，于25?℃水浴中反應5?min后，用紫外-可見分光光度儀測定最大吸收波長600?nm處的吸光值；隨著肝素酶的含量在2-1000?μg/L范圍內增加，顯色體系在最大吸收波長600?nm處的吸收值降低，記錄波長600?nm處的吸光值，根據A₀與A的差值繪制標準曲線，其中A₀為空白吸光值，A為含有汞離子吸光值，在20-1000?μg/L范圍內與肝素酶濃度呈線性關系，檢測限為15?μg/L。

2.?根據權利要求1所述的基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是能根據紫外吸收光譜的最大吸收波長600?nm處的吸收值以判斷肝素酶的濃度。

3.?根據權利要求1所述的基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是汞離子能通過如下方式增敏鋨納米粒子的氧化酶活性：在0.4?mL，50?μM汞離子中加入0.1?mL濃度為38?mg/L的肝素修飾鋨納米粒子，繼而在混合溶液中再加入3300?μL?pH=6，20?mM的磷酸鹽緩沖溶液和200?μL濃度為2?mM的3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，于25?℃水浴中反應5?min后，用紫外-可見分光光度儀測定最大吸收波長600?nm處的吸光值。

4.?根據權利要求1所述的基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的肝素酶檢測方法，其特征是汞離子加入的濃度為50?μM及肝素酶與肝素修飾鋨納米粒子的混合時間為15分鐘。

5.?一種基于汞離子增敏鋨納米粒子氧化酶活性的血清中肝素酶檢測方法，其特征是包括如下步驟：100?μL濃度為38?mg/L的肝素修飾鋨納米粒子與200?μL血清樣品在25?℃下混合15分鐘后加入0.4?mL，50?μM汞離子，在混合溶液中陸續加入3300?μL?pH=6，20?mM的磷酸鹽緩沖溶液和200?μL濃度為2?mM的3,?3’,?5,?5’-四甲基聯苯胺鹽酸鹽，于25?℃水浴中反應5?min后，用紫外-可見分光光度儀測定最大吸收波長600?nm處的吸光值，根據顯色體系溶液顏色初步判斷或通過根據A₀與A的差值繪制的標準曲線進行定量，其中A₀為空白吸光值，A為含有肝素酶吸光值，獲得血清樣品中肝素酶含量；

所使用的肝素修飾鋨納米粒子由下述方法制備的：將0.1?g的肝素與1?mL濃度為10?mM的六氯鋨酸鉀混合，再加入48?mL雙蒸水，避光條件下攪拌30分鐘，隨后加入1?mL濃度為0.2M的硼氫化鈉，繼續攪拌90分鐘，溶液顏色由淺綠色變為淺棕色，制得50?mL濃度為38?mg/L的肝素修飾鋨納米粒子。