[發(fā)明專利]一組用單管檢測(cè)人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元基因的引物及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910944785.0
• 申請(qǐng)日: 2019-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN110669833B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳英松;周其偉;康小龍;李明;楊學(xué)習(xí)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州市達(dá)瑞生物技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發(fā)明公開了一組用單管檢測(cè)人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元基因的引物及試劑盒。本試劑盒含有一組用單管檢測(cè)人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元基因的引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示。本發(fā)明的引物設(shè)計(jì)合理、特異性高，避免普通單向單堿基錯(cuò)配的擴(kuò)增阻滯引物特異性不足；合理地設(shè)計(jì)不同擴(kuò)增子長(zhǎng)度、引入通用引物并采用兩次循環(huán)的同步擴(kuò)增、減少了擴(kuò)增偏倚性低，保證定量準(zhǔn)確；合理引入識(shí)別序列，實(shí)現(xiàn)對(duì)SMN1和SMN2第7號(hào)外顯子相互轉(zhuǎn)換情況辨識(shí)，提供更多拷貝數(shù)信息；體系中引入了UDG酶、擴(kuò)增程序中加入U(xiǎn)DG酶酶切步驟能夠有效切割擴(kuò)增產(chǎn)物，避免污染。本方法和試劑盒檢測(cè)快速、結(jié)果準(zhǔn)確、成本適宜，其適用儀器在臨床占有率高，非常適宜在臨床中廣泛應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一組用單管檢測(cè)人運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元基因的引物及試劑盒。

背景技術(shù)

脊髓性肌萎縮癥(SMA)以脊髓前角細(xì)胞(即下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元)和腦干細(xì)胞核的進(jìn)行性退變和丟失導(dǎo)致的肌無(wú)力、肌萎縮為特征的隱性遺傳病。在針對(duì)SMA的多種族研究表明，SMA的總體攜帶率頻率為1/40～1/100，發(fā)病率約為1/11000，中國(guó)人群的攜帶率則約為1/50。根據(jù)SMA患者的發(fā)病年齡和臨床表現(xiàn)，SMA患者可分為4型：I型為嚴(yán)重型(OMIM#253300)，占SMA的60％～70％，患兒一般無(wú)法獨(dú)立站立，2歲內(nèi)會(huì)死于呼吸衰竭；II型為中間型(OMIM#253550)，患兒能獨(dú)自站立，單不能獨(dú)立行走，生存時(shí)間可超過(guò)2歲；III型為輕型(OMIM#253400)，患兒或成人可獨(dú)立行走，可存活至成年；IV型為成年型(OMIM#221750)，表型較輕，成年起病，會(huì)出現(xiàn)四肢無(wú)力癥狀，但生存時(shí)間與正常人無(wú)差別。

SMA致病機(jī)制為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元基因(SMN1)因缺失、轉(zhuǎn)換以及點(diǎn)突變等原因?qū)е耂MN蛋白的功能缺陷；疾病臨床表型的輕重則與SMN2基因拷貝數(shù)相關(guān)。運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因(SMN,NCBI#6606)位于人5號(hào)染色體的5q13位置，包括端粒側(cè)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因1(SMN1)和著絲粒側(cè)的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活基因2(SMN1)。SMN1和SMN2高度同源，均含有9個(gè)外顯子，僅存在5個(gè)堿基的差異。SMN1為主要功能基因，而SMN2為修飾基因。主要是因?yàn)镾MN2與SMN1在第7號(hào)外顯子差異，其編碼序列(840C＞T)導(dǎo)致mRNA發(fā)生截短，編碼的其蛋白功能約為SMN1的10％。根據(jù)美國(guó)ACMG在2011發(fā)布的關(guān)于《SMA檢測(cè)的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和指導(dǎo)原則》說(shuō)明，95％的SMA患者為SMN1基因第7號(hào)外顯子純合缺失(包括缺失、SMN1轉(zhuǎn)換為SMN2等突變類型)導(dǎo)致；5％為一條染色體上SMN1基因第7號(hào)外顯子缺失，另一條染色體上SMN1基因發(fā)生點(diǎn)突變導(dǎo)致；其他的為復(fù)雜雜合突變導(dǎo)致，發(fā)生率極低。根據(jù)NCBI提供序列，SMN基因終止密碼子位于第7號(hào)外顯子末端。因此，SMA的診斷和攜帶者(“1+0”型和“2+0”型)篩查的關(guān)鍵在于對(duì)SMN1基因第7號(hào)外顯子拷貝數(shù)的定量檢測(cè)；另外SMA患者的表型分型的分子診斷則依賴于SMN2基因拷貝數(shù)的定量檢測(cè)。因此，對(duì)于SMA檢測(cè)診斷，確定SMN1和SMN2的第7號(hào)外顯子的拷貝數(shù)情況，即能滿足大多SMA患者診斷或攜帶者篩查的需求，經(jīng)濟(jì)、有效。