[發(fā)明專利]一種通用的食用菌發(fā)酵物料中重要微生物的鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910942694.3
• 申請日: 2019-09-30
• 公開（公告）號: CN110551807A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 雋加香;高照亮;黃建春;陳明杰;王倩;肖婷婷;陳輝;宋曉霞;張津京
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C12Q1/04
• 代理公司: 31334 上海段和段律師事務(wù)所
• 代理人: 李慧;郭國中

本發(fā)明提供了一種通用的食用菌發(fā)酵物料中重要微生物的鑒定方法，包括以下步驟：S1、采樣培養(yǎng)：從食用菌二次發(fā)酵料中采集出倉二次料后，進(jìn)行活化；S2、篩選與純化：將活化后的出倉二次料采用不同培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待菌落半徑擴(kuò)大至1厘米后，再接種進(jìn)行純化培養(yǎng)；S3、鑒定：將純化培養(yǎng)后的菌落進(jìn)行基因組DNA提取，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所得產(chǎn)物回收后進(jìn)行DNA測序，并通過比對即得到各菌落的鑒定結(jié)果。本發(fā)明的方法可同時得到多種不同類型的微生物，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，為食用菌發(fā)酵物料中的重要微生物的作用研究奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食用菌培養(yǎng)料中的微生物分離純化鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種通用的食用菌發(fā)酵物料中重要微生物的鑒定方法。

背景技術(shù)

隨著人們生活水平的提高，市場對于食用菌的需求越來越大，生產(chǎn)食用菌需要制備大量培養(yǎng)料，制備良好的培養(yǎng)料中含有大量的有益微生物，其中，有些重要微生物必須在培養(yǎng)料的發(fā)酵過程中才能正常生長，有些重要微生物可以在分離純化后人工培養(yǎng)，本發(fā)明適用于可以人工培養(yǎng)的微生物。某種微生物分離純化成功后，再通過NCBI物種相似度比對進(jìn)行鑒定，鑒定完成后即可研究此種微生物在食用菌培養(yǎng)料發(fā)酵過程中的作用。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種通用的食用菌發(fā)酵物料中重要微生物的鑒定方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明提供了一種通用的食用菌發(fā)酵物料中重要微生物的鑒定方法，包括以下步驟：

S1、采樣培養(yǎng)：從食用菌二次發(fā)酵料中采集出倉二次料后，進(jìn)行活化；

S2、篩選與純化：將活化后的出倉二次料采用不同培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，待菌落半徑擴(kuò)大至1厘米后，再接種進(jìn)行純化培養(yǎng)；

S3、鑒定：將純化培養(yǎng)后的菌落進(jìn)行基因組DNA提取，然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，所得產(chǎn)物回收后進(jìn)行DNA測序，并通過比對即得到各菌落的鑒定結(jié)果。

優(yōu)選地，所述食用菌為雙孢蘑菇。

優(yōu)選地，步驟S1中，所述活化的條件為：將出倉二次料封裝后置于55℃、濕度約為60％的培養(yǎng)箱中活化12小時。

優(yōu)選地，步驟S2中，所述培養(yǎng)基包括PGA培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、改良高氏1號培養(yǎng)基。

優(yōu)選地，所述PGA培養(yǎng)基的制備為：以1L水的量計(jì)，將蛋白胨5.0g，葡萄糖10.0g，酵母粉1.0g，碳酸鈣3g，氯化鈉5g，瓊脂15g溶解在水中，在121℃滅菌20min；

所述牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備為：以1L水的量計(jì)，將牛肉膏5g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂18.0g溶解在蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH7.0～7.2；121℃滅菌20min；

所述孟加拉紅培養(yǎng)基的制備為：以1L水的量計(jì)，將蛋白胨5.0g，葡萄糖10.0g，磷酸二氫鉀1.0g，硫酸鎂0.5g，瓊脂20.0g，孟加拉紅0.033g，氯霉素0.1g溶解在蒸餾水中，121℃滅菌30min；

所述改良高氏1號培養(yǎng)基的制備為：以1L水的量計(jì)，將可溶性淀粉20.0g，硝酸鉀1.0g，磷酸氫二鉀0.5g，硫酸鎂0.5g，硫酸亞鐵0.01g，氯化鈉0.5g，瓊脂18.0g溶解在蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH7.2-7.4；配制時將可溶性淀粉先加少量冷蒸餾水調(diào)成糊狀后，再加入沸蒸餾水中；121C，20min滅菌；臨用時在每300mL培養(yǎng)基中加3％重鉻酸鉀1mL。

優(yōu)選地，步驟S2中，所述培養(yǎng)基為PGA培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時，培養(yǎng)方法如下：