[發明專利]一種同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶和α-淀粉酶的方法

有效

• 申請號: 201910941211.8
• 申請日: 2019-09-30
• 公開（公告）號: CN110564709B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 蔡志強;張宇;祁荃;郭靜;朱孝霖;楊廣花
• 申請（專利權）人: 上海開鴻環保科技有限公司
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N9/50;C12N9/26
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1.一種同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三種蛋白的方法，其特征在于，所述方法為采用硫酸銨鹽析以及Q Beads 6 FF陰離子層析進行三種蛋白的純化，所述方法具體步驟如下： (1)通過硫酸銨鹽析的方法確定三種蛋白析出時所對應的硫酸銨飽和度； (2)將5-10倍柱體積鹽析后的酶液上樣于Q柱，流速為1-5mL/min，上樣前酶液需經0 .45 μm濾頭過濾除雜； (3)配制50-400mM的NaCl溶液，按照5-10倍柱體積梯度洗脫Q柱，收集各梯度的洗脫液， 濃縮后進行酶活與蛋白測定； (4)將濃縮液進行SDS-PAGE電泳，觀察蛋白純化后的效果。

2.根據權利要求1所述的同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三種蛋白的方法，其特征在于，步驟(1)所述的硫酸銨鹽析方法具體為，分別將三種酶粉與各自的緩沖液按照1:10的比例進行稀釋，混勻后8 ,000rpm離心5min，在上清液中加入硫酸銨粉末使硫酸銨飽和度達到40％，靜置30min后，8 ,000rpm再次離心5min，在上清液中再次加入硫酸銨粉末使硫酸銨飽和度達到50％，靜置，再次離心后，上清液補充硫酸銨至60％飽和度，梯度鹽析直至硫酸銨飽和度為90％，最后收集各梯度的上清和沉淀放入透析袋中除鹽。

3.根據權利要求2所述的同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三種蛋白的方法，其特征在于，步驟(1)中純化脂肪酶的緩沖液為pH 7 .5的磷酸鹽緩沖液，純化酸性蛋白酶以及 α-淀粉酶的緩沖液為pH 7 .6的Tris-HCl。

4.根據權利要求2所述的同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三種蛋白的方法，其特征在于，步驟(1)中除鹽的方法為將沉淀再次溶解于相應的緩沖液中放入截留分子量為3kDa的透析袋，兩端夾緊后放入緩沖液中4℃透析12h除鹽。

5.根據權利要求1所述的同步純化脂肪酶、酸性蛋白酶、α-淀粉酶三種蛋白的方法，其特征在于，步驟(3)中收集的洗脫液需用濃縮管離心進行濃縮，濃縮管濃縮5倍體積量。