[發(fā)明專利]一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法及裝置

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910936218.0
• 申請(qǐng)日: 2019-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111005073A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳海波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深蘭科技（上海）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C40B50/06
• 分類(lèi)號(hào): C40B50/06
• 代理公司: 北京同達(dá)信恒知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11291
• 代理人: 朱琳愛(ài)義

本發(fā)明涉及基因高通量測(cè)序技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法及裝置。用于提高處理效率，降低測(cè)序成本，該方法為：將片段化的若干DNA經(jīng)過(guò)磁珠純化后獲得若干第一樣本，將若干第一樣本進(jìn)行補(bǔ)平末端后得到若干第二樣本，并在若干第二樣本的溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本，將若干第三樣本進(jìn)行接頭補(bǔ)齊和P7標(biāo)簽擴(kuò)增后得到多樣本文庫(kù)，其中，所述多樣本文庫(kù)中每個(gè)樣本所攜帶的P5標(biāo)簽和P7標(biāo)簽用于唯一標(biāo)識(shí)每個(gè)樣本。這樣，可以通過(guò)處理片段化的若干DNA，得到多樣本文庫(kù)，提升資源利用率，降低生產(chǎn)成本，并且，避免出現(xiàn)樣本混亂的情況，提高對(duì)樣本的識(shí)別性能，提高測(cè)序效率，滿足對(duì)多樣本文庫(kù)的構(gòu)建需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因高通量測(cè)序技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法及裝置。

背景技術(shù)

隨著20世紀(jì)90年代人類(lèi)基因組計(jì)劃的啟動(dòng)，六國(guó)科學(xué)家耗資30億美元，用時(shí)13年成功繪制了人類(lèi)基因組序列圖譜，奠定了人類(lèi)探索生命本質(zhì)的基礎(chǔ)。人類(lèi)基因組測(cè)序的完成標(biāo)志著分子醫(yī)學(xué)時(shí)代的到來(lái)，也催生了高通量測(cè)序(Next Generation Sequencing，NGS)技術(shù)，即，第二代測(cè)序技術(shù)。NGS技術(shù)被稱為測(cè)序技術(shù)發(fā)展史上的一個(gè)里程碑，該技術(shù)可以對(duì)數(shù)百萬(wàn)個(gè)脫氧核糖核酸(DeoxyriboNucleic Acid，DNA)分子同時(shí)進(jìn)行測(cè)序，這使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全面的分析成為可能，為生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、轉(zhuǎn)化應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

經(jīng)過(guò)十幾年，NGS技術(shù)得到了飛速發(fā)展，NGS技術(shù)已經(jīng)從科研的小眾領(lǐng)域逐漸走向了臨床，應(yīng)用在產(chǎn)前篩查、腫瘤檢測(cè)、遺傳病篩查和胚胎植入前篩查等領(lǐng)域。無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前診斷胚胎染色體非整倍性異常是應(yīng)用成熟的第一個(gè)轉(zhuǎn)化技術(shù)，部分國(guó)家或城市已將此項(xiàng)檢查納入居民醫(yī)療保障體系，臨床應(yīng)用的推廣帶動(dòng)了測(cè)序市場(chǎng)的發(fā)展。但是，現(xiàn)有NGS技術(shù)難以滿足對(duì)文庫(kù)構(gòu)建的日益增長(zhǎng)要求，無(wú)法進(jìn)一步提高測(cè)序效率，影響文庫(kù)制備環(huán)節(jié)的效率，增加文庫(kù)構(gòu)建的成本，難以保證NGS技術(shù)的廣泛推廣。

因此，需要設(shè)計(jì)一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法以解決上述問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法及裝置，以有效提高處理效率，降低測(cè)序成本。

一種多樣本文庫(kù)的構(gòu)建方法，包括：

通過(guò)酶切獲得片段化的若干脫氧核糖核酸DNA，并將所述若干DNA經(jīng)過(guò)磁珠純化后獲得若干第一樣本；

將所述若干第一樣本進(jìn)行補(bǔ)平末端后得到若干第二樣本，并在所述若干第二樣本的溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本，其中，所述第三樣本中每個(gè)樣本的5’端攜帶P5標(biāo)簽的P5接頭，所述每個(gè)樣本的3’端攜帶通用的P7接頭；

將所述若干第三樣本進(jìn)行接頭補(bǔ)齊和P7標(biāo)簽擴(kuò)增，得到多樣本文庫(kù)，其中，所述多樣本文庫(kù)中每個(gè)樣本所攜帶的P5標(biāo)簽和P7標(biāo)簽用于唯一標(biāo)識(shí)每個(gè)樣本。

可選的，在將所述若干第一樣本進(jìn)行補(bǔ)平末端后得到若干第二樣本之后，在若干第二樣本溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本之前，進(jìn)一步包括：

根據(jù)預(yù)設(shè)的DNA樣本數(shù)目，設(shè)置所述第一試劑的第一數(shù)目和所述第二試劑的第二數(shù)目；

將包含所述P5接頭的溶液按照預(yù)設(shè)的第一溶液濃度進(jìn)行稀釋，獲得所述第一數(shù)目的所述第一試劑，以及將包含所述P7接頭的溶液按照預(yù)設(shè)的第二溶液濃度進(jìn)行稀釋，獲得所述第二數(shù)目的所述第二試劑。

可選的，在根據(jù)所述預(yù)設(shè)的DNA樣本數(shù)目，設(shè)置所述第一試劑的第一數(shù)目之后，在將包含所述P5接頭的溶液按照預(yù)設(shè)的第一溶液濃度進(jìn)行稀釋之前，進(jìn)一步包括：

確定所述P5接頭中正鏈的數(shù)量和反鏈的數(shù)量，并確定所述正鏈的數(shù)量和所述反鏈的數(shù)量中的最小值；

按照所述最小值將正鏈和反鏈進(jìn)行等量混合，獲得具有雙鏈結(jié)構(gòu)的所述P5接頭。