[發明專利]一種多樣本文庫的構建方法及裝置

在審

• 申請號: 201910936218.0
• 申請日: 2019-09-29
• 公開（公告）號: CN111005073A
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發明（設計）人: 陳海波
• 申請（專利權）人: 深蘭科技（上海）有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 北京同達信恒知識產權代理有限公司 11291
• 代理人: 朱琳愛義

1.一種多樣本文庫的構建方法，其特征在于，包括：

通過酶切獲得片段化的若干脫氧核糖核酸DNA，并將所述若干DNA經過磁珠純化后獲得若干第一樣本；

將所述若干第一樣本進行補平末端后得到若干第二樣本，并在所述若干第二樣本的溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本，其中，所述第三樣本中每個樣本的5’端攜帶P5標簽的P5接頭，所述每個樣本的3’端攜帶通用的P7接頭；

將所述若干第三樣本進行接頭補齊和P7標簽擴增，得到多樣本文庫，其中，所述多樣本文庫中每個樣本所攜帶的P5標簽和P7標簽用于唯一標識每個樣本。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在將所述若干第一樣本進行補平末端后得到若干第二樣本之后，在若干第二樣本溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本之前，進一步包括：

根據預設的DNA樣本數目，設置所述第一試劑的第一數目和所述第二試劑的第二數目；

將包含所述P5接頭的溶液按照預設的第一溶液濃度進行稀釋，獲得所述第一數目的所述第一試劑，以及將包含所述P7接頭的溶液按照預設的第二溶液濃度進行稀釋，獲得所述第二數目的所述第二試劑。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在根據所述預設的DNA樣本數目，設置所述第一試劑的第一數目之后，在將包含所述P5接頭的溶液按照預設的第一溶液濃度進行稀釋之前，進一步包括：

確定所述P5接頭中正鏈的數量和反鏈的數量，并確定所述正鏈的數量和所述反鏈的數量中的最小值；

按照所述最小值將正鏈和反鏈進行等量混合，獲得具有雙鏈結構的所述P5接頭。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述若干第三樣本進行接頭補齊和P7標簽擴增，得到多樣本文庫，具體包括：

確定所述若干第三樣本中的各個接頭的末端不平時，在所述末端處補充堿基，并將所述若干第三樣本經過磁珠純化后獲得若干第四樣本，其中，所述各個接頭包括所述帶P5標簽的P5接頭和所述通用的P7接頭，所述各個接頭是由若干堿基構成的序列；

在若干第四樣本溶液中加入第三試劑，并將所述若干第四樣本經過磁珠純化后獲得若干第五樣本，以及將攜帶所述P5標簽和P7標簽的所述若干第五樣本作為所述多樣本文庫，其中，所述第三試劑攜帶所述P7標簽的P7引物，所述第四樣本中每個樣本的3’端攜帶所述P7標簽的P7接頭。

5.如權利要求2所述的方法，其特征在于，將包含所述P5接頭的溶液按照預設的第一溶液濃度進行稀釋，獲得所述第一數目的所述第一試劑，具體包括：

獲取包含所述P5接頭的所述溶液的濃度，并根據所述溶液的濃度與溶劑之間的對應關系確定需要添加的溶劑的體積；

將所述溶液與所述體積的溶劑進行混合，獲得所述第一試劑，其中，所述第一試劑的濃度等于所述第一溶液濃度。

6.一種多樣本文庫的構建裝置，其特征在于，包括：

第一處理單元，用于通過酶切獲得片段化的若干脫氧核糖核酸DNA，并將所述若干DNA經過磁珠純化后獲得若干第一樣本；

第二處理單元，用于將所述若干第一樣本進行補平末端后得到若干第二樣本，并在所述若干第二樣本的溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本，其中，所述第三樣本中每個樣本的5’端攜帶P5標簽的P5接頭，所述每個樣本的3’端攜帶通用的P7接頭；

構建單元，用于將所述若干第三樣本進行接頭補齊和P7標簽擴增，得到多樣本文庫，其中，所述多樣本文庫中每個樣本所攜帶的P5標簽和P7標簽用于唯一標識每個樣本。

7.如權利要求6所述的裝置，其特征在于，在將所述若干第一樣本進行補平末端后得到若干第二樣本之后，在若干第二樣本溶液中加入第一試劑和第二試劑，獲得若干第三樣本之前，所述第二處理單元進一步用于：

根據預設的DNA樣本數目，設置所述第一試劑的第一數目和所述第二試劑的第二數目；

將包含所述P5接頭的溶液按照預設的第一溶液濃度進行稀釋，獲得所述第一數目的所述第一試劑，以及將包含所述P7接頭的溶液按照預設的第二溶液濃度進行稀釋，獲得所述第二數目的所述第二試劑。