[發(fā)明專利]與西葫蘆PRSV-W病毒病抗性相關(guān)的分子標(biāo)記及其應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910933494.1 | 申請日： | 2019-09-27 |
| 公開（公告）號： | CN112575101B | 公開（公告）日： | 2022-11-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張國裕;李海真;張帆;田佳星;賈長才 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京市農(nóng)林科學(xué)院 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 王灝增 |
| 地址： | 10009*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 西葫蘆 prsv 病毒 抗性 相關(guān) 分子 標(biāo)記 及其 應(yīng)用 | ||
1.鑒定西葫蘆基因型的方法，所述基因型為RR基因型、RS基因型和SS基因型，所述方法包括如下L1）和L2）：
L1）以待測西葫蘆基因組DNA為模板，采用A1進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到PCR產(chǎn)物；
L2）下述L21）或L22）：
L21）檢測步驟L1）得到的PCR產(chǎn)物的大小，根據(jù)所述PCR產(chǎn)物的大小確定西葫蘆基因型：
所述PCR產(chǎn)物含有162bp和146bp的DNA片段的所述待測西葫蘆的基因型為RS基因型；所述PCR產(chǎn)物含有162bp的DNA片段、不含有146bp的DNA片段的所述待測西葫蘆的基因型為SS基因型；所述PCR產(chǎn)物不含有162bp的DNA片段、含有146bp的DNA片段的所述待測西葫蘆的基因型為RR基因型；
L22）檢測步驟L1）得到的PCR產(chǎn)物的序列，根據(jù)所述PCR產(chǎn)物確定西葫蘆基因型：
所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的DNA片段的所述待測西葫蘆的基因型為RS基因型；所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.2所示的DNA片段、不含SEQ ID No.1所示的DNA片段，所述待測西葫蘆的基因型為RR基因型；所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.1所示的DNA片段、不含SEQ ID No.2所示的DNA片段，所述待測西葫蘆的基因型為SS基因型；
所述A1由名稱為P1和P2的單鏈DNA組成，所述P1為SEQ ID No.1的第1-22位所示的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1的第162-144位反向互補(bǔ)的單鏈DNA，
所述基因型為SS基因型的西葫蘆為感PRSV-W病毒病型西葫蘆，所述基因型為RS基因型的西葫蘆為抗PRSV-W病毒病型西葫蘆，所述基因型為RR基因型的西葫蘆為抗PRSV-W病毒病型西葫蘆。
2.鑒定或輔助鑒定西葫蘆PRSV-W病毒病抗性性狀的方法包括如下N1）和N2）：
N1）以待測西葫蘆基因組DNA為模板，采用A1進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到PCR產(chǎn)物，所述A1由名稱為P1和P2的單鏈DNA組成，所述P1為SEQ ID No.1的第1-22位所示的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1的第162-144位反向互補(bǔ)的單鏈DNA；
N2）如下N21）或N22）：
N21）檢測步驟N1）得到的PCR產(chǎn)物的大小，如果所述PCR產(chǎn)物含有162bp和146bp的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗PRSV-W病毒病西葫蘆；如果所述PCR產(chǎn)物含有146bp的DNA片段、不含162bp的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗PRSV-W病毒病西葫蘆；如果所述PCR產(chǎn)物不含有146bp的DNA片段、含有162bp的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為非抗PRSV-W病毒病西葫蘆；
N22）檢測步驟N1）得到的PCR產(chǎn)物的序列，如果所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.1和SEQ IDNo.2所示的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗PRSV-W病毒病西葫蘆；如果所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.2所示的DNA片段、不含SEQ ID No.1所示的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為抗PRSV-W病毒病西葫蘆；如果所述PCR產(chǎn)物含有SEQ ID No.1所示的DNA片段、不含SEQ ID No.2所示的DNA片段，所述待測西葫蘆為或候選為非抗PRSV-W病毒病西葫蘆。
3.下述H1-H3中任一應(yīng)用：
H1、權(quán)利要求1或2所述方法在鑒定或輔助鑒定PRSV-W病毒病抗性性狀穩(wěn)定遺傳西葫蘆中的應(yīng)用；
H2、權(quán)利要求1或2所述方法在西葫蘆育種中的應(yīng)用；
H3、權(quán)利要求1所述鑒定西葫蘆基因型的方法在鑒定或輔助鑒定西葫蘆PRSV-W病毒病抗性性狀中的應(yīng)用。
4.西葫蘆育種方法，按照權(quán)利要求1所述的方法鑒定西葫蘆的基因型，選擇RR或RS基因型的西葫蘆作為親本進(jìn)行育種。
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