[發明專利]與西葫蘆PRSV-W病毒病抗性相關的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201910933494.1
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN112575101B
• 公開（公告）日: 2022-11-15
• 發明（設計）人: 張國裕;李海真;張帆;田佳星;賈長才
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 王灝增

本發明涉及一種與西葫蘆PRSV?W病毒病抗性相關的分子標記及其應用。本發明所提供的西葫蘆PRSV?W病毒病分子標記，為以西葫蘆的基因組DNA為模板，采用引物對A1進行擴增得到的DNA分子；所述A1由名稱為P1和P2的單鏈DNA組成，所述P1為與SEQ ID No.1的第39位上游特異結合的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1的第54位下游特異結合的單鏈DNA。實驗證明，可以利用鑒定或輔助鑒定西葫蘆PRSV?W病毒病抗性性狀的引物對A1和西葫蘆PRSV?W病毒病分子標記鑒定西葫蘆的PRSV?W病毒病的抗性情況。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體的說，涉及一種與西葫蘆PRSV-W病毒病抗性相關的分子標記及其應用。

背景技術

西葫蘆(Cucurbita pepoL.)是我國重要的瓜類蔬菜，栽培面積具有逐年擴大的趨勢，特別是保護地栽培面積目前僅次于黃瓜，已成為農民增收、農業結構調整的重要種植作物。

番木瓜環斑病毒西瓜株系(PRSV-W)是危害西葫蘆生產的主要病毒病之一，田間發病普遍，危害嚴重。西葫蘆植株感染PRSV-W病毒病后葉片呈現花葉、皺縮卷曲等癥狀，后期嚴重可導致植株矮縮，果實表面瘤狀凸凹不平、果肉僵硬且味苦澀等癥狀，使果實失去商品價值，可造成40％以上的產量損失，嚴重威脅西葫蘆的安全生產。

目前還沒有防治PRSV-W病毒病的有效試劑和措施，田間生產中主要依靠防治蚜蟲及時拔除掩埋發病植株來控制降低病毒病的傳播與危害。培育和推廣抗病品種是減少病毒病危害最為經濟、安全、有效的措施。但目前，由于通過人工接種進行抗性鑒定存在操作繁瑣、性狀鑒定準確性差、易于雜染其它病毒致使育種中途選擇失敗等問題，導致抗性性狀轉育困難，抗病育種效率低、周期長、易失敗等問題。與抗病基因緊密連鎖的分子標記可以提高選擇的準確性、加速抗病育種進程，是分子標記輔助選擇育種的必要條件。但目前國內外還沒有可實際利用的與西葫蘆PRSV-W抗病基因緊密連鎖分子標記的研究報道。因此，開發與葫蘆PRSV-W抗病基因緊密連鎖的分子標記，對于提高西葫蘆抗病育種效率，拓展抗病基因應用范圍，培育抗病新品種，保障西葫蘆產業的健康發展具有重要的實際應用價值。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何鑒定西葫蘆的PRSV-W病毒病抗性性狀。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了西葫蘆PRSV-W病毒病分子標記。

本發明所提供的與西葫蘆PRSV-W病毒病抗性相關的分子標記，為以西葫蘆的基因組DNA為模板，采用引物對A1進行擴增得到的DNA分子；所述A1由名稱為P1和P2的單鏈DNA組成，所述P1為與SEQ ID No.1所示的雙鏈DNA的第39位上游特異結合的單鏈DNA，所述P2為與SEQ ID No.1所示的雙鏈DNA的第54位下游特異結合的單鏈DNA。

上述西葫蘆分子標記的多態性可為西葫蘆基因組中對應于SEQ ID No.1第39-54位為SEQ ID No.1第39-54位或缺失SEQ ID No.1第39-54位。

上述西葫蘆分子標記中，所述P1可為SEQ ID No.1的第1-22位所示的單鏈DNA，所述P2可為與SEQ ID No.1的第144-162位反向互補的單鏈DNA。

為解決上述技術問題，本發明還提供了鑒定西葫蘆基因型的方法。

本發明所提供的鑒定西葫蘆基因型的方法，所述基因型為RR基因型、RS基因型和SS基因型，所述方法為如下Ⅰ或Ⅱ：

Ⅰ、包括如下K1)和K2)：

K1)以待測西葫蘆基因組DNA為模板，采用所述A1進行PCR擴增得到PCR產物；

K2)檢測步驟K1)得到的PCR產物，根據所述PCR產物確定西葫蘆基因型：