[發明專利]一種含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法

有效

• 申請號: 201910933233.X
• 申請日: 2019-09-29
• 公開（公告）號: CN112574285B
• 公開（公告）日: 2023-05-16
• 發明（設計）人: 袁慧星;熊戰魁;尹傳龍;陶安進;余品香
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司;翰宇藥業（武漢）有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈

1.一種含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)采用Serb?Resin樹脂制備氨基酸樹脂Fmoc-AA-NH₂-Serb?Resin，然后采用特定的弱酸敏感的保護基Fmoc氨基酸，合成肽樹脂；

2)樹脂裂解，同時形成二硫鍵；

3)沉淀得到粗肽；

所述步驟1)為采用Serb?Resin樹脂為合成起點，制備氨基酸樹脂Fmoc-AA-NH₂-SerbResin，然后根據多肽固相合成法，按照肽序從C端至N端依次偶聯氨基酸合成多肽樹脂，其中多肽樹脂中引入的Cys采用的原料為Fmoc-Cys(弱酸敏感的保護基)-OH，若多肽樹脂中含有Arg，則引入Arg采用的原料為Fmoc-Arg(HCl)-OH，若多肽樹脂中含有His，則引入His采用的原料為Fmoc-His(弱酸敏感的保護基)-OH，若多肽樹脂中含有Tyr，則引入Tyr采用的原料為Fmoc-Tyr-OH，若多肽樹脂中含有Asn，則引入Asn采用的原料為Fmoc-Asn-OH，若多肽樹脂中含有Gln，則引入Gln采用的原料為Fmoc-Gln-OH；

所述步驟2)為采用肽樹脂重量的8-10倍體積的TFE的DCM溶液，其中TFE與DCM的體積比為1：4，滴加等體積的重量百分數為0.5～1.5％碘的DCM溶液，繼續攪拌15-35分鐘；

所述弱酸敏感的保護基為Mmt；

所述的含一對二硫鍵的多肽藥物是精氨酸加壓素、去氨加壓素或縮宮素。

2.根據權利要求1所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述含一對二硫鍵的多肽為肽序中的氨基酸側鏈保護基可以是采用TFE的DCM溶液，其中TFE與DCM的體積比為1：4，且在合成過程中不宜發生副反應的一類多肽。

3.根據權利要求1所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述步驟2)為采用TFE的DCM溶液，其中TFE與DCM的體積比為1：4，然后滴加重量百分數為0.5～1.5％碘的DCM溶液。

4.根據權利要求1所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述步驟3)為室溫濃縮混合液至1/2體積，采用裂解液8-10倍體積的乙醚沉淀，得到粗肽。

5.根據權利要求1-4任一所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述Serb?Resin樹脂的替代度為0.4-0.7mmol/g。

6.根據權利要求1所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述粗肽的合成步驟后還包括純化步驟。

7.根據權利要求6所述的含一對二硫鍵的多肽藥物的固液相合成方法，其特征在于，所述純化步驟以高壓液相色譜法進行純化。