[發(fā)明專利]一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910927492.1 | 申請日: | 2019-09-27 |
| 公開(公告)號: | CN110538197A | 公開(公告)日: | 2019-12-06 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 曹毓琳;白志惠 | 申請(專利權(quán))人: | 北京臻惠康生物科技有限公司 |
| 主分類號: | A61K35/28 | 分類號: | A61K35/28;A61K38/39;A61P17/14 |
| 代理公司: | 11419 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) | 代理人: | 王玉松;宋丹丹<國際申請>=<國際公布> |
| 地址: | 100034 北京市西城區(qū)*** | 國省代碼: | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 脫發(fā) 間充質(zhì)干細胞 膠原蛋白 試驗 治療 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明提供了一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用,該外泌體是將膠原蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)入間充質(zhì)干細胞外泌體中,試驗證實,本發(fā)明提供的外泌體對脫發(fā)具有較好的效果。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物細胞技術(shù)領(lǐng)域,特別涉及一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)
外泌體是一類細胞外小囊泡,大小在30-100nm之間,幾乎存在于所有的真核生物的體液中,并具有促進一系列細胞功能的作用。它們將DNAs、RNA和蛋白質(zhì)等遺傳信號平行轉(zhuǎn)移到其它臨近和遠處的細胞,從而改變靶細胞的功能,外泌體通過交換遺傳信息來充當(dāng)干細胞的旁分泌調(diào)節(jié)因子,在干細胞治療方面扮演著十分重要的作用,研究發(fā)現(xiàn),外泌體具有促進皮膚創(chuàng)傷愈合的能力,但其治療脫發(fā)的功效還未被研究過。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決以上技術(shù)問題,本發(fā)明提供了一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用。
一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用,該外泌體的制備方法是將膠原蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)入間充質(zhì)干細胞外泌體內(nèi)。
間充質(zhì)干細胞外泌體包括人胎盤間充質(zhì)干細胞外泌體、人臍帶間充質(zhì)干細胞外泌體和人羊水間充質(zhì)干細胞外泌體中的一種或多種
進一步的改進,該外泌體由以下步驟制備而成:
(1)取間充質(zhì)干細胞外泌體,均勻地溶解于PBS緩沖液中,制得A液;
(2)將步驟(1)制得的A液與膠原蛋白分別加入到電穿孔皿中,采用電穿孔儀對其進行電穿孔轉(zhuǎn)導(dǎo),制得B液;
(3)將步驟(2)制得的B液用PBS緩沖液進行洗滌,再用電轉(zhuǎn)染緩沖液重懸沉淀,轉(zhuǎn)染時的電壓為240V-300V,電容為120μF-200μF,即得具有治療脫發(fā)功效的外泌體。
進一步的改進,電轉(zhuǎn)染緩沖液包括RPMI-1640培養(yǎng)基和添加入RPMI-1640培養(yǎng)基中的氯化鉀、脫氧核苷酸鈉和HEPES,其中氯化鉀在RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為10-20mMol/L,脫氧核苷酸鈉在RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為5-7mMol/L,HEPES在RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為30-50mMol/L。
本發(fā)明通過具體限定電轉(zhuǎn)染緩沖液,能夠進一步地提高外泌體的功效;其中,HEPES為4-羥乙基哌嗪乙磺酸,RPMI-1640培養(yǎng)基的成分如下:
本發(fā)明還提供了一種生發(fā)劑,所述生發(fā)劑包括質(zhì)量比為1-3:50-80的外泌體與輔料,所述外泌體的制備方法是將膠原蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)入間充質(zhì)干細胞外泌體內(nèi)。
進一步地,外泌體在制備成生發(fā)劑前進行預(yù)處理制得外泌體納米粒,所述預(yù)處理方法包括以下步驟:
S1通過冷凍干燥技術(shù)將外泌體處理為外泌體粉末;
S2取質(zhì)量比為6-8:18-20的角鯊?fù)楹吞妓岫刘ィ旌暇鶆蛑频没旌嫌拖啵瑢⑼饷隗w粉末加入混合油相中混合均勻,外泌體粉末在混合油相中的濃度為5-9mg/ml,制得油相溶液;
S3將酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜堿溶于90℃-95℃的水中,酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜堿在水中的濃度分別為1-3mg/ml、8-10mg/ml、1-3mg/ml,制得水相溶液;
S4將油相溶液加入水相溶液中,所述油相與所述水相的體積比為2-6:10-12,用高剪切乳化劑以1000-1500rpm的轉(zhuǎn)速乳化20-40min,制得初乳;
S5將初乳在40-50℃條件下高壓乳勻,壓力為500-1000bar,循環(huán)次數(shù)為3-5次,冷卻至室溫,干燥至粉末,即得外泌體納米粒。
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