[發(fā)明專利]一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910927492.1
• 申請(qǐng)日: 2019-09-27
• 公開（公告）號(hào): CN110538197A
• 公開（公告）日: 2019-12-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹毓琳;白志惠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京臻惠康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/28
• 分類號(hào): A61K35/28;A61K38/39;A61P17/14
• 代理公司: 11419 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)
• 代理人: 王玉松;宋丹丹<國(guó)際申請(qǐng)>=<國(guó)際公布>

1.一種外泌體在治療脫發(fā)的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述外泌體的制備方法是將膠原蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)入間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體內(nèi)。

2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體包括人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體和人羊水間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中的一種或多種。

3.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述外泌體由以下步驟制備而成：

(1)取間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，均勻地溶解于PBS緩沖液中，制得A液；

(2)將步驟(1)制得的A液與膠原蛋白分別加入到電穿孔皿中，采用電穿孔儀對(duì)其進(jìn)行電穿孔轉(zhuǎn)導(dǎo)，制得B液；

(3)將步驟(2)制得的B液用PBS緩沖液進(jìn)行洗滌，再用電轉(zhuǎn)染緩沖液重懸沉淀，轉(zhuǎn)染時(shí)的電壓為240V-300V，電容為120μF-200μF，即得具有治療脫發(fā)功效的外泌體。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述電轉(zhuǎn)染緩沖液包括RPMI-1640培養(yǎng)基和添加入所述RPMI-1640培養(yǎng)基中的氯化鉀、脫氧核苷酸鈉和HEPES，其中所述氯化鉀在所述RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為10-20mMol/L，所述脫氧核苷酸鈉在所述RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為5-7mMol/L，所述HEPES在所述RPMI-1640培養(yǎng)基中的濃度為30-50mMol/L。

5.一種生發(fā)劑，其特征在于，所述生發(fā)劑包括質(zhì)量比為1-3:50-80的外泌體與輔料，所述外泌體的制備方法是將膠原蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)入間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體內(nèi)。

6.如權(quán)利要求5所述的生發(fā)劑，其特征在于，所述外泌體在制備成生發(fā)劑前進(jìn)行預(yù)處理制得外泌體納米粒，所述外泌體納米粒包括外泌體、角鯊?fù)?、碳酸二辛酯、酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜堿，所述預(yù)處理方法包括以下步驟：

S1通過冷凍干燥技術(shù)將外泌體處理為外泌體粉末；

S2取質(zhì)量比為6-8:18-20的角鯊?fù)楹吞妓岫刘ィ旌暇鶆蛑频没旌嫌拖?，將外泌體粉末加入混合油相中混合均勻，外泌體粉末在混合油相中的濃度為5-9mg/ml，制得油相溶液；

S3將酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜堿溶于90℃-95℃的水中，酚醚磷酸酯、甘草甜素、椰油酰胺基丙基甜菜堿在水中的濃度分別為1-3mg/ml、8-10mg/ml、1-3mg/ml，制得水相溶液；

S4將油相溶液加入水相溶液中，所述油相與所述水相的體積比為2-6:10-12，用高剪切乳化劑以1000-1500rpm的轉(zhuǎn)速乳化20-40min，制得初乳；

S5將初乳在40-50℃條件下高壓乳勻，壓力為500-1000bar，循環(huán)次數(shù)為3-5次，冷卻至室溫，干燥至粉末，即得外泌體納米粒。

7.如權(quán)利要求6所述的生發(fā)劑，其特征在于，所述輔料包括質(zhì)量比為4-8:22-40:6-10:18-22的乳酸鈉、維生素E、酪朊酸鈉和水。

8.如權(quán)利要求7所述的生發(fā)劑，其特征在于，所述生發(fā)劑還包括天然玻璃酸鈉、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、免疫調(diào)節(jié)因子和抗氧因子，所述外泌體納米粒與所述天然玻璃酸鈉、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、免疫調(diào)節(jié)因子和抗氧因子的質(zhì)量比為1-3:6-10:1-2:12-16:8-10。

9.如權(quán)利要求8所述的生發(fā)劑，其特征在于，所述生發(fā)劑的制備方法包括以下步驟：

A.將規(guī)定質(zhì)量比的外泌體納米粒、乳酸鈉、酪朊酸鈉、水、天然玻璃酸鈉、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、免疫調(diào)節(jié)因子和抗氧因子在10-12℃條件下攪拌18-22min，攪拌速度為300-400r/min，制得混合液；

B.將維生素E加入步驟A制得的混合液中，常溫下攪拌5-10min，攪拌速度為600-800r/min，升溫至90-98℃繼續(xù)攪拌40-50min，冷卻至室溫，即得生發(fā)劑。

10.權(quán)利要求1所述的外泌體在制備具有治療脫發(fā)的生發(fā)劑中的應(yīng)用。