[發明專利]一種高產L-賴氨酸的重組菌株及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201910926308.1
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110607313B
• 公開（公告）日: 2021-06-22
• 發明（設計）人: 孟剛;馬風勇;周曉群;賈慧萍;蘇厚波;楊立鵬;高曉航;田斌
• 申請（專利權）人: 內蒙古伊品生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C12N15/74;C12N1/21;C12P13/08;C12R1/15;C12R1/19
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 田芳

1.一種多核苷酸基因，其特征在于，所述多核苷酸基因的序列為SEQ ID NO:1所示的野生型pobB基因編碼序列第139和811位堿基均由鳥嘌呤(G)突變為腺嘌呤(A)的序列，所述突變的多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.重組蛋白，其特征在于，所述重組蛋白由權利要求1所述的多核苷酸基因編碼。

3.根據權利要求2所述的重組蛋白，所述重組蛋白的氨基酸序列為SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。

4.重組載體，包括如權利要求1所述的多核苷酸基因。

5.根據權利要求4所述的重組載體，所述重組載體是將所述多核苷酸基因導入質粒構建而成。

6.一種重組菌株，其含有如權利要求1所述的多核苷酸基因。

7.一種權利要求6所述的重組菌株的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)改造如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，使其第139和811位堿基發生突變，得到突變的pobB基因開放閱讀框區域多核苷酸基因；

(2)將所述突變的多核苷酸基因與質粒連接，構建重組載體；

(3)將所述重組載體導入宿主菌株，得到所述重組菌株。

8.根據權利要求7所述的構建方法，所述宿主菌株為谷氨酸棒桿菌或大腸桿菌。

9.根據權利要求8所述的構建方法，所述宿主菌株為CGMCC No.12856谷氨酸棒桿菌。

10.根據權利要求7所述的構建方法，所述步驟(1)包括：以谷氨酸棒桿菌ATCC13032為模板，分別以引物P1和P2、P3和P4、P5和P6，進行PCR擴增，獲得三條DNA片段；將上述三條DNA片段純化后，再以上述三條DNA片段為模板，以P1和P6為引物，通過重疊PCR擴增，獲得pobB^{(G139A,G811A)}，所述引物的序列分別為：P1引物如SEQ ID NO.5所示，P2引物如SEQ ID NO.6所示，P3引物如SEQ ID NO.7所示，P4引物如SEQ ID NO.8所示，P5引物如SEQ ID NO.9所示，P6引物如SEQ ID NO.10所示。

11.根據權利要求7所述的構建方法，所述步驟(2)包括將分離純化后的pobB^{(G139A,G811A)}和質粒，分別用限制性內切酶進行雙酶切，經DNA連接酶連接，獲得重組載體pK18-pobB^{(G139A,G811A)}。

12.根據權利要求7所述的構建方法，所述步驟(3)包括將所述重組載體電轉化至宿主菌株。

13.如權利要求1-6任一項所述的多核苷酸基因、重組蛋白、重組載體或重組菌株在L-賴氨酸制備中的應用。

14.根據權利要求13所述的應用，是將所述重組菌株發酵制備L-賴氨酸。