[發明專利]用于Y染色體微缺失檢測的引物組、試劑盒及基于數字PCR的檢測方法

在審

• 申請號: 201910925088.0
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110656167A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發明（設計）人: 殷建;尹煥才;袁通闊;劉荻
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 11369 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 張川

本發明公開了一種用于Y染色體微缺失檢測的引物組、試劑盒及基于數字PCR的檢測方法。本發明針對AZFa亞區sY84和sY86位點，AZFb亞區sY127和sY134位點，AZFc亞區sY254和sY255位點設計了引物組，且其具有高靈敏度、準確客觀的優點。本發明提供的檢測方法可快速、高靈敏且高準確度地檢測無精子癥病人的Y染色體微缺失情況，并可有效降低對樣本量的要求，從而可將外周血采集進一步降低至指尖血，減小病人痛苦，且可避免病人DNA樣本較少時造成的假陰性結果；本發明采用數字PCR方法進行檢查，檢測結果不依賴于Ct值即可獲得，并可直觀反映DNA樣本的原始拷貝數，從而減少了檢測者的工作量。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種用于Y染色體微缺失檢測的引物組、試劑盒及基于數字PCR的檢測方法。

背景技術

不孕不育是全球重要的生殖健康問題，大約15％的夫婦會遭遇生育困難或者無法生育的困境，而30％～50％的不育癥是由于男性無精或少精等原因引起。當前，男性不育的一個重要原因就是染色體結構異常以及染色體基因的微缺失。臨床結果表明，原發性無精和少精癥患者中約10％～15％存在Y染色體微缺失，且這一癥狀可隨著輔助生殖技術傳遞給下一代。因此Y染色體微缺失檢測對男性生殖遺傳學臨床治療、提高輔助生殖技術的療效和安全性以及開展胚胎植入前遺傳學診斷具有重要意義。

傳統Y染色體微缺失的檢測方法主要在PCR技術的基礎上展開。國內臨床實驗室多依據歐洲男科協會(European Academy of Andrology，EAA)和歐洲分子遺傳質量協作網(European Molecular Genetics Quality Network，EMQN)提出的方案，采集外周血標本進行多重PCR凝膠電泳、熒光定量(q)PCR以及毛細管電泳等方法進行檢測。但這些技術耗時長，結果判定主觀性較大，靈敏度較低，不符合目前臨床檢驗技術更快、更靈敏、樣品需求更少的發展方向。

數字PCR是20世紀初發展起來的新型核酸定量技術，與傳統PCR相比，其可對微量模板進行絕對定量分析，具有更高的準確性、特異性、靈敏性和檢測速度。與此同時，數字PCR檢測和分析過程自動化程度也比較高，減少了人工結果判定的誤差，更減少了熒光定量PCR檢測由于低拷貝數檢測不到而導致對結果的誤判。所以，將數字PCR用于Y染色體微缺失檢測是一個研究方向，但現有技術中缺失相關方案。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于針對上述現有技術中的不足，提供一種用于Y染色體微缺失檢測的引物組、試劑盒及基于數字PCR的檢測方法。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：提供一種用于Y染色體微缺失檢測的引物組，包括以下引物組：

用于檢測SY84位點的引物對，序列為：

上游引物AGAAGCGTCTGATAGCAGGT，下游引物GCCTACTACCTGGAGGCTTC；

用于檢測SY86位點的引物對，序列為：

上游引物GTGACACACAGACTATGCTTC，下游引物ACACACAGAGTGACAACACT；

用于檢測SY127位點的引物對，序列為：

上游引物GGCTCACAAACGACGAGAAA，下游引物CTGCAGGCAGTAATAAGTGA；

用于檢測SY134位點的引物對，序列為：

上游引物GTCTGCCTCACCATATCACG，下游引物ACCACTGCCAAAACTGTCAA；

用于檢測SY254位點的引物對，序列為：

上游引物TGGTGTTACCAGAAGGCAAA，下游引物GAACCGTATCTACCATAGCAGC；