[發(fā)明專利]用于Y染色體微缺失檢測的引物組、試劑盒及基于數(shù)字PCR的檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910925088.0
• 申請日: 2019-09-27
• 公開（公告）號: CN110656167A
• 公開（公告）日: 2020-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 殷建;尹煥才;袁通闊;劉荻
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 11369 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 張川

1.一種用于Y染色體微缺失檢測的引物組，其特征在于，包括以下引物組：

用于檢測SY84位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物AGAAGCGTCTGATAGCAGGT，下游引物GCCTACTACCTGGAGGCTTC；

用于檢測SY86位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物GTGACACACAGACTATGCTTC，下游引物ACACACAGAGTGACAACACT；

用于檢測SY127位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物GGCTCACAAACGACGAGAAA，下游引物CTGCAGGCAGTAATAAGTGA；

用于檢測SY134位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物GTCTGCCTCACCATATCACG，下游引物ACCACTGCCAAAACTGTCAA；

用于檢測SY254位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物TGGTGTTACCAGAAGGCAAA，下游引物GAACCGTATCTACCATAGCAGC；

用于檢測SY255位點(diǎn)的引物對，序列為：

上游引物GTTACAGGATTCGGCGTGAT，下游引物CTCGTCATGTGCAGCGAC。

2.一種用于Y染色體微缺失檢測的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于Y染色體微缺失檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括：PCR預(yù)混液、陽性對照、陰性對照和微滴生成油。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于Y染色體微缺失檢測的試劑盒，其特征在于，所述PCR預(yù)混液包括染料、Taq酶、dNTP、MgCl₂。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于Y染色體微缺失檢測的試劑盒，其特征在于，所述Taq酶反應(yīng)濃度為6U，dNTP的反應(yīng)濃度為0.8mM，MgCl₂終濃度為5.6mM。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于Y染色體微缺失檢測的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為：健康成年男性的外周血中獲得的血細(xì)胞DNA，濃度為：10-80ng/ul，所述陰性對照為無菌去離子水。

7.一種用于Y染色體微缺失檢測的基于數(shù)字PCR的檢測方法，其特征在于，該方法利用如權(quán)利要求2-6中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，通過數(shù)字PCR的方法，進(jìn)行Y染色體微缺失檢測。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于Y染色體微缺失檢測的基于數(shù)字PCR的檢測方法，其特征在于，其包括以下步驟：

1)采集待測病人的血液，進(jìn)行DNA提取，獲得待測DNA樣本；

2)將獲得的DNA樣品與PCR預(yù)混液、引物組、無菌水均勻混合；

3)將步驟2)得到的混合液生成微滴；

4)將生成的微滴置于數(shù)字PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行擴(kuò)增，獲得PCR產(chǎn)品；

5)使用微滴讀數(shù)儀對獲得的PCR產(chǎn)品進(jìn)行檢測分析。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于Y染色體微缺失檢測的基于數(shù)字PCR的檢測方法，其特征在于，所述步驟1)中，待測DNA樣本的濃度≥0.0001ng/ul。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于Y染色體微缺失檢測的基于數(shù)字PCR的檢測方法，其特征在于，所述步驟4)中，PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋好讣せ?5℃，保持5分鐘；然后95℃保持30秒、60℃保持1分鐘，并進(jìn)行40個循環(huán)；4℃保持5分鐘；90℃保持5分鐘。