[發明專利]一種快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201910917627.6
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110488005A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 林斯;張衡;韓艷華
• 申請（專利權）人: 天津華科泰生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 11228 北京匯澤知識產權代理有限公司
• 代理人: 李巖<國際申請>=<國際公布>=<進入國

1.一種快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，包括試紙條，所述試紙條包括檢測線及質控線，其特征在于，所述檢測線上包被有一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體，所述質控線上包被有羊抗兔多克隆抗體。

2.如權利要求1所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，其特征在于，所述試紙條還包括PVC板，所述PVC板上固定有依次連接的樣品墊、標記物墊、包被墊及吸水墊，所述包被墊上依次設有檢測線及質控線，所述樣品墊和標記物墊連接為一體。

3.如權利要求2所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，其特征在于，所述包被墊靠近檢測線的一端連接有標記物墊，靠近質控線的一端連接有吸水墊。

4.如權利要求3所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，其特征在于，所述標記物墊上包被有另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體標記的表面活化的熒光乳膠微球和兔IgG標記的表面活化的熒光乳膠微球，所述另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體標記的表面活化的熒光乳膠微球和兔IgG標記的表面活化的熒光乳膠微球的摩爾比為1:0.2～4。

5.如權利要求4所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，其特征在于，所述快速檢測可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡還包括用于卡設試紙條的卡殼。

6.如權利要求5所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡，其特征在于，所述卡殼包括：

底槽，其連接于所述PVC板；

上蓋，其連接于所述底槽，所述上蓋上設置有用于向所述樣品墊上加樣的加樣孔；

觀察窗，其設置于上蓋上并用于檢測線和質控線的數據采集。

7.一種權利要求1-6任一項所述的快速檢測孕婦可溶性血管內皮生長因子受體-1的免疫層析檢測卡的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)包被墊的制備：將一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體和羊抗兔多克隆抗體分別包被到硝酸纖維素膜上，干燥備用；

2)標記物墊的制備：將另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體標記的表面活化的熒光乳膠微球和兔IgG標記的表面活化的熒光乳膠微球混合后，噴涂在玻璃纖維素膜上，干燥備用；

3)組裝試紙條：在PVC板上粘接包被墊，并在靠近該包被墊上的質控線的一端搭接吸水墊，在靠近該包被墊上的檢測線的一端搭接標記物墊及其連接的樣品墊；然后將其切成所需寬度的試紙條，之后將該試劑條放入卡殼。

8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述表面活化的熒光乳膠微球通過以下步驟制得：

1)取表面活性劑加入0.1～0.5mol/L，pH值為8～10的硼酸-硼砂緩沖溶液中，再加入二甲基甲酰胺、N,N’-二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，攪拌反應；所述硼酸-硼砂緩沖溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000；

2)取表面帶有羧基的熒光乳膠微球的分散液，以硼酸-硼砂緩沖溶液調pH至8～10后，加入到步驟1)所得的產物中，在25℃下攪拌反應1～5h，反應完畢后，離心去除上清液，得到表面活化的熒光乳膠微球，用硼酸-硼砂緩沖溶液復溶備用；所述硼酸-硼砂緩沖溶液包含0.5wt％～3wt％的PEG2000。

9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述表面活性劑包含有N，N'-雙月桂?；叶范┧徕c、聚乙二醇單月硅酸酯、十二烷基苯磺酸鹽和月桂酰谷氨酸鹽，四者的重量比為(0.5～6):(4～9):(0.8～3):(5～14)；所述表面活性劑與所述氨基表面的熒光乳膠微球的重量比為(0.5～120):1。

10.如權利要求8或9所述的制備方法，其特征在于，所述另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體標記的表面活化的熒光乳膠微球通過以下步驟制得：

取表面活化的熒光乳膠微球加入碳化二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺中室溫攪拌2～6h，然后加入另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體，室溫下攪拌1～4h，再加入10～50mg BSA封閉液，繼續攪拌1～4h；在2～8℃下，離心，除去上清液；最后，用0.01M～0.5M，pH＝7.4的磷酸鹽緩沖溶液將固體沉淀物復溶，再加入Proclin300在4℃下保存待用；

其中，所述表面活化的熒光乳膠微球與另一株鼠抗人sFlt-1單克隆抗體的質量比例為1：(0.01～4)。