[發明專利]一種Fe3

有效

• 申請號: 201910916384.4
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110632295B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 王立新;沈艷飛;張越
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

本發明公開了一種Fe₃O₄?Au抗體納米磁珠及其制備方法與應用。其中所述的Fe₃O₄抗體納米磁珠的制備方法為Fe₃O₄溶液由聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾，AuNPs靜電吸附到聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾后的Fe₃O₄上，得到Fe₃O₄?Au，微管相關蛋白輕鏈3B抗體共價結合到修飾后的Fe₃O₄?Au上，即得。本發明所提供的Fe₃O₄?Au抗體納米磁珠填補了目前富集純化分泌型自噬小體的空缺，其不需要對樣品進行的復雜處理，有優異的抗干擾性能，對分泌型自噬小體具有很高的選擇性；另外，Fe₃O₄?Au抗體納米磁珠在富集純化分泌型自噬小體的應用，具有富集效率高、產物純度高，操作簡便的優勢。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及一種基于Fe₃O₄-Au特異性富集純化分泌型自噬小體的納米磁珠的制備方法與應用。

背景技術

腫瘤是嚴重威脅人類健康的高發病率和高死亡率疾病，大量研究和臨床資料證實，早期診斷和早期治療是防治腫瘤與降低腫瘤患者死亡率的最有效辦法。因此，尋找有助于早期診斷的腫瘤標志物是人們一直關注的焦點。新型的腫瘤標志物可以為癌癥的早期診斷提供更多可能，因此，新型腫瘤標志物的檢測及應用具有良好的前景。

自噬是指吞噬自身細胞質蛋白或細胞器并使其包被進入囊泡，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解其所包裹的內容物的過程。酵母細胞和哺乳動物細胞內形成的自噬小體能夠釋放至胞外，稱之為分泌型自噬小體，自噬小體的特征性標記是LC3B(微管相關蛋白輕鏈3B)。

研究證實，腫瘤細胞釋放自噬小體(TRAP)攜帶損傷相關分子模式(DAMP)分子，通過TLR2-MyD88-NF-κB信號通路誘導B細胞分化為IL-10⁺B細胞；通過大胞飲方式吞噬TRAP的中性粒細胞可產生活性氧(ROS)從而誘導中性粒細胞凋亡；TRAP 影響巨噬細胞極化。多種證據證實，分泌型自噬小體TRAP與腫瘤的發生發展密切相關。

分泌型自噬小體在腫瘤患者胸腹水及外周血中均有，但含量少，不易捕獲和檢測，目前常用提取分泌型自噬小體的方法為差速離心法，但操作繁瑣，產物純度低。免疫磁珠常用于純化，操作簡便，產物純度較高，在不同領域已有應用，具有廣闊應用前景。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足，提供了一種Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠。

進一步的，本發明還提供了Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備方法。

最后，本發明還提供了Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠在富集純化分泌型自噬小體中的應用。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備方法，其中，Fe₃O₄溶液由聚二烯丙基二甲基氯化銨(PDDA)修飾，AuNPs靜電吸附到PDDA 修飾后的Fe₃O₄上，得到Fe₃O₄-Au，微管相關蛋白輕鏈3B(LC3B)抗體共價結合到修飾后的Fe₃O₄-Au上，即得。

上述Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備方法，具體包括如下步驟：