[發明專利]一種Fe3

有效

• 申請號: 201910916384.4
• 申請日: 2019-09-26
• 公開（公告）號: CN110632295B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 王立新;沈艷飛;張越
• 申請（專利權）人: 東南大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備方法，其特征在于，Fe₃O₄溶液由聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾，AuNPs靜電吸附到聚二烯丙基二甲基氯化銨修飾后的Fe₃O₄上，得到Fe₃O₄-Au，微管相關蛋白輕鏈3B抗體共價結合到修飾后的Fe₃O₄-Au上，即得，包括如下步驟：

1）Fe₃O₄-Au的制備：將Fe₃O₄溶液與聚二烯丙基二甲基氯化銨混合震蕩10~40 min，離心得到沉淀物，將沉淀物水洗，按每克濕沉淀物重懸于0.8~1.5 mL水中，加入AuNPs室溫混合震蕩5~10 h，離心得到沉淀物，將沉淀物水洗，重懸于水，得到Fe₃O₄-Au溶液；所述聚二烯丙基二甲基氯化銨的質量百分比為2%~5%；Fe₃O₄溶液與聚二烯丙基二甲基氯化銨的體積比為1:0.6~1:0.2；所述AuNPs的pH值為6.5~7.8；Fe₃O₄溶液與AuNPs的體積比為1:6~1:15；所述Fe₃O₄-Au溶液的濃度為0.5~2 mg/mL，pH值為8.0~10.0；

2）Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備：將步驟1）制備得到的Fe₃O₄-Au溶液加入到4-巰基丁酸中，室溫震蕩10~24 h；磁性分離，水洗，重懸于水，加入1-丁硫醇，室溫振蕩40~80 min；磁性分離，水洗，重懸于PBS；加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽/氮羥基琥珀酰亞胺溶液室溫振蕩100~160 min，磁性分離，PBS洗，按每克濕沉淀物重懸于0.8~1.5 mLPBS中；加入LC3B抗體，2~10℃振蕩10~24 h；加入BSA，2~10℃攪拌40~80 min，磁性分離，PBS洗，重懸于PBS，獲得Fe₃O₄4-Au抗體納米磁珠溶液; 所述4-巰基丁酸的濃度為0.8~1.2 mM，Fe₃O₄-Au溶液與4-巰基丁酸的體積比為6000:1~4000:1；所述1-丁硫醇的濃度為0.8~1.2mM，Fe₃O₄-Au溶液與1-丁硫醇的體積比為6000:1~4000:1；所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽/ 氮羥基琥珀酰亞胺溶液中1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽的濃度為15~30 mg/mL，氮羥基琥珀酰亞胺的濃度為5~15 mg/mL，溶劑為pH=6.0的PBS，Fe₃O₄-Au溶液與1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽/氮羥基琥珀酰亞胺溶液的體積比為1:0.8~1:1.5；所述LC3B抗體的濃度為0.8~1.2 mg/mL，Fe₃O₄-Au溶液與LC3B抗體的體積比為50:1~200:1；所述BSA的質量百分比為0.2%~2%；所述的磁性分離為用磁鐵吸引磁性納米顆粒Fe₃O₄-Au-LC3B抗體復合物。

2.根據權利要求1所述Fe₃O₄-Au抗體納米磁珠的制備方法，其特征在于，所述Fe₃O₄溶液的制備方法如下：將FeCl₃與檸檬酸鈉溶于乙二醇，隨后加入乙酸鈉，攪拌10~40 min，倒入反應釜中，反應制備Fe₃O₄溶液。