[發(fā)明專利]康寧木霉LCCC30119在生產(chǎn)纖維素酶和煙葉發(fā)酵中的應用

在審

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• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110616153A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發(fā)明（設計）人: 柴穎;陳順;郝捷;韓冰;紀旭東;陳晨;溫源;趙賽月;王偉華;王旭東;李力群;喬月梅
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古昆明卷煙有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/42;A24B15/20;C12R1/885
• 代理公司: 11716 北京君慧知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王寬

本發(fā)明提供了一種康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119在生產(chǎn)纖維素酶和煙葉發(fā)酵中的應用，康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119能夠產(chǎn)生高酶活性的纖維素酶，利用康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119生產(chǎn)纖維素酶，為纖維素酶的生產(chǎn)來源提供了一個新的途徑，可以實現(xiàn)纖維素酶的規(guī)模化生產(chǎn)；將具有產(chǎn)高酶活力的纖維素酶的康寧木霉應用到煙葉發(fā)酵中，能加速煙葉中纖維素的降解，明顯縮短煙葉的發(fā)酵周期，提升煙葉的品質(zhì)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119在生產(chǎn)纖維素酶煙葉發(fā)酵中的應用，屬于微生物應用的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

纖維素酶不是單一酶，而是指生物降解植物纖維素生成葡萄糖的三種起協(xié)同作用的一組酶，只有在三類酶的協(xié)同作用下，才能最終把纖維素分子分解為葡萄糖。纖維素酶在煙葉醇化過程中的主要酶類，能促使煙葉理化特性發(fā)生變化。

目前，煙葉在采摘經(jīng)過打葉復烤后，并不能實現(xiàn)工業(yè)的可用性，還需要經(jīng)過自然醇化以及人工醇化，造成時間以及資金的積壓，會給煙草企業(yè)帶來很大的損失，同時一些煙葉隨著時間的推移，造成工業(yè)的不可用性，會帶來更大的損失，而生物酶的意義就在于能夠提高煙葉的可用性。

研究發(fā)現(xiàn)有很多微生物可以分解纖維素，目前產(chǎn)纖維素酶的真菌主要有木霉屬和曲霉屬。康寧木霉是產(chǎn)纖維素酶最常使用到的菌株，但未見利用已有的康寧木霉菌株用來生產(chǎn)高活性纖維素酶及發(fā)酵煙葉的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119在生產(chǎn)纖維素酶和煙葉發(fā)酵中的應用，康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119能夠高產(chǎn)纖維素酶，十分適用于生產(chǎn)纖維素酶和煙葉發(fā)酵。

一方面，本發(fā)明提供了康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119在生產(chǎn)纖維素酶中的應用，康寧木霉LCCC30119能夠產(chǎn)生高酶活性的纖維素酶，為纖維素酶的生產(chǎn)來源提供了一個新的來源。

另一方面，本發(fā)明還提供了一種利用康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119生產(chǎn)纖維素酶的方法，該方法包括將康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119進行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液經(jīng)離心得粗酶液的步驟。

優(yōu)選的，所述發(fā)酵培養(yǎng)為液體發(fā)酵培養(yǎng)或固體發(fā)酵培養(yǎng)。

優(yōu)選的，液體發(fā)酵培養(yǎng)的條件為：康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119的接種量為10⁵-10⁷cfu/ml，發(fā)酵溫度為30～60℃，時間為2～4d，所述發(fā)酵培養(yǎng)為通風培養(yǎng)，通風量為1：0.8～1.2V/V·min；

優(yōu)選的，接種量為10⁶cfu/ml，發(fā)酵溫度為50℃，時間為3d，通風量為1.0V/V·min。

優(yōu)選的，所述液體發(fā)酵培養(yǎng)所用的液體培養(yǎng)基含有麩皮粉4g/L、酵母膏0.5g/L、玉米粉2g/L、硫酸銨0.1g/L、磷酸二氫鉀0.2g/L，pH為5-8，液體培養(yǎng)基的裝量為60～80％；

優(yōu)選的，pH為7.6，液體培養(yǎng)基的裝量為75％。

優(yōu)選的，所述固體發(fā)酵培養(yǎng)采用三級發(fā)酵工藝，具體包括以下步驟：

(1)在斜面PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)康寧木霉LCCC30119菌種，得到菌懸浮液；

(2)將菌懸浮液接種于液體培養(yǎng)基上擴大培養(yǎng)，得到種子液；