[發明專利]康寧木霉LCCC30119在生產纖維素酶和煙葉發酵中的應用

在審

• 申請號: 201910913660.1
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110616153A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 柴穎;陳順;郝捷;韓冰;紀旭東;陳晨;溫源;趙賽月;王偉華;王旭東;李力群;喬月梅
• 申請（專利權）人: 內蒙古昆明卷煙有限責任公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/42;A24B15/20;C12R1/885
• 代理公司: 11716 北京君慧知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 王寬

1.康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119在生產纖維素酶中的應用。

2.利用康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119生產纖維素酶的方法，其特征在于，該方法包括將康寧木霉LCCC30119進行發酵培養，發酵液經離心得粗酶液的步驟。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述發酵培養為液體發酵培養或固體發酵培養。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，液體發酵培養的條件為：康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119的接種量為10⁵-10⁷cfu/ml，發酵溫度為30～60℃，時間為2～4d，所述發酵培養為通風培養，通風量為1：0.8～1.2V/V·min；

優選的，接種量為10⁶cfu/ml，發酵溫度為50℃，時間為3d，通風量為1：1.0V/V·min。

5.根據權利要求2或3所述的方法，所述液體發酵培養所用的液體培養基含有麩皮粉4g/L、酵母膏0.5g/L、玉米粉2g/L、硫酸銨0.1g/L、磷酸二氫鉀0.2g/L，pH為5-8，液體培養基的裝量為60～80％；

優選的，pH為7.6，液體培養基的裝量為75％。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述固體發酵培養采用三級發酵工藝，具體包括以下步驟：

(1)在斜面PDA培養基上培養康寧木霉(Trichoderma

koningii)LCCC30119菌種，得到菌懸浮液；

(2)將菌懸浮液接種于液體培養基上擴大培養，得到種子液；

(3)將種子液以10⁵-10⁷cfu/g接種于固體培養基，在溫度為30～60℃，通風培養后真空干燥，加蒸餾水過濾，得發酵液；

優選的，所述PDA培養基含有：土豆200g/L、葡萄糖20g/L、瓊脂15g/L；

和/或液體培養基含有：麩皮粉4g/L、酵母膏0.5g/L、玉米粉2g/L、硫酸銨0.1g/L、磷酸二氫鉀0.2g/L；

和/或固體培養基含有：稻殼粉55％、麩皮30％、玉米粉10％、酵母膏3％、硫酸銨1.5％、磷酸二氫鉀0.5％；

優選的，通風培養的通風量為1：0.8～1.2V/V·min；

優選的，通風量為1：1.0V/V·min。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，發酵液離心的溫度為0～4℃，轉速為5000～8000rpm，時間為10～20min。

8.康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119或權利要求2～7任一項所述的方法在煙葉發酵中的應用。

9.一種煙葉發酵方法，其特征在于，在煙葉中接種康寧木霉(Trichoderma koningii)LCCC30119進行發酵。

10.根據權利要求9所述的煙葉發酵方法，其特征在于，康寧木霉LCCC30119的接種量為10⁵～10⁷cfu/g，發酵的溫度為30～60℃，濕度為40～70％，時間為5～10d。