[發明專利]一種魷魚墨海洋微生物培養基的制備方法

有效

• 申請號: 201910911057.X
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110564618B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 郭健;宋文東;蔡璐;紀麗麗;王亞寧;王振
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 吳秉中

本發明提出了一種魷魚墨海洋微生物培養基的制備方法，包括以下步驟為：S1.配置缺少氮源、碳源的不完全培養基；S2.培養基的制備：將魷魚墨與滅菌人工海水混合，調節pH，消毒，將魷魚墨?海水混合液與不完全培養基、滅菌改性硅藻土混勻，得到魷魚墨海洋微生物培養基。本發明工藝簡單合理、易操作，以葛仙米糖蛋白和魷魚墨作為培養基補充氮源和碳源，制得的魷魚墨培養基具篩選抗氧化性良好的適應低濃度營養狀態的魷魚體內部海洋微生物，本培養基專一性較強，適合與魷魚等相似的頭足類海洋動物的體內微生物的篩選。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種魷魚墨海洋微生物培養基的制備方法。

背景技術

魷魚墨約占魷魚體重的1.3%，是魷魚加工的主要副產物之一（張井.北太平洋魷魚內臟酶解液中重金屬鎘的脫除研究[D].中國海洋大學碩士學位論文,2009.），黑色素是目前所知的唯一保護生物體免受輻射傷害的天然內源生物聚合體，具有抗氧化、促進免疫功能、促進骨髓造血和防止衰老等功能。頭足類海洋生物體內含有類似的墨汁，魷魚墨主要成分為黑色素和蛋白多糖復合體，其內的微生物與宿主未共生關系，可為微生物提供碳源和氮源，海洋微生物的篩選一直是微生物實驗工作者的一個難點（衣堯.海洋微生物抗腫瘤活性產物的篩選、菌種鑒定及產物的初步研究[D].上海海洋大學碩士學位論文,2013.），海洋的環境具有高鹽度、寡營養等特點，而頭足類海洋生物的內生微生物的相關研究領域較為薄弱，利用相似的培養條件，模擬共生狀態，可使頭足類海洋生物的內生微生物具備與環境相適應的次生代謝產物，也同樣具備與真黑色素相似的性質，且可擴大規模，降低成本。

發明內容

本發明提供一種魷魚墨海洋微生物培養基及其制備方法，其目的在于，提供一種魷魚墨海洋微生物培養基，以葛仙米糖蛋白和魷魚墨作為培養基補充氮源和碳源，制得的魷魚墨培養基具篩選抗氧化性良好的適應低濃度營養狀態的魷魚體內部海洋微生物，本培養基專一性較強，適合與魷魚等相似的頭足類海洋動物的體內微生物的篩選。

本發明提供一種魷魚墨海洋微生物培養基的制備方法，包括以下步驟為：

S1.?配置缺少氮源、碳源的不完全培養基：加入MgSO₄，使其質量分數為0.01-0.04%，加入KH₂PO₄，使其質量分數為0.11-0.14%，加入牛肉膏，使其質量分數0.05%-0.1%，加入人工海水調配，使其質量分數為3-3.5%，用0.1mol/L的NaOH溶液調節混合液pH至7.0-7.4，高溫滅菌得到滅菌完成的不完全培養基；

S2.?培養基的制備：將魷魚墨與滅菌人工海水按照質量體積比1:60-90混合，調節pH至7.0-7.4，消毒，于超凈工作臺中將魷魚墨-海水混合液與步驟S1得到的不完全培養基、滅菌改性硅藻土混勻，得到魷魚墨海洋微生物培養基；

所述改性硅藻土為葛仙米糖蛋白/硅藻土復合材料。

作為本發明進一步的改進，所述改性硅藻土的制備方法為將葛仙米糖蛋白加入0.5wt%的木醋液溶液中溶解，攪拌后加入硅藻土，繼續攪拌混合均勻，40℃烘干研細，得到改性硅藻土。

作為本發明進一步的改進，所述葛仙米糖蛋白與木醋液的質量體積比為1：20-50，所述葛仙米糖蛋白與硅藻土的質量比為1:5-10。

作為本發明進一步的改進，所述攪拌混合為200-500r/min攪拌1h。

作為本發明進一步的改進，所述葛仙米糖蛋白的制備方法為將葛仙米干粉加入水中沸水提取1-2h，離心，濃縮至相對密度為2-2.5，加入75%的乙醇沉淀，得到黏性蛋白產物后加入混合有機溶劑，攪拌后靜置24h，收集上清液，加入75%的乙醇沉淀，離心，收集沉淀，得到葛仙米糖蛋白。