[發明專利]檢測肺癌或腸癌中特異性T細胞分泌的細胞因子的方法

在審

• 申請號: 201910910076.0
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110646619A
• 公開（公告）日: 2020-01-03
• 發明（設計）人: 蔡振寨;俞耀軍;朱岳升;蘇小平;胡磊
• 申請（專利權）人: 格源致善(上海)生物科技有限公司;溫州醫科大學附屬第二醫院;溫州醫科大學附屬育英兒童醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 50230 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 陳炳萍

本發明屬于醫學檢測應用技術領域，公開了一種檢測肺癌或腸癌中特異性T細胞分泌的細胞因子的方法，體系由檢測樣本、靶標、檢測樣本的刺激抗原和/或陽性對照抗原、檢測樣本的常規試劑組成。檢測體系中的樣本為肺癌或腸癌患者外周血分離后的單核細胞，然后經多肽多輪刺激后檢測特異性T細胞分泌的細胞因子。本發明通過單核細胞誘導成DC細胞，然后將DC細胞與T細胞共培養，加多肽刺激三次后檢測特異性T細胞分泌的細胞因子，在不影響檢測靈敏度的情況下，從而達到縮短整個體系的檢測時間。本發明提供的檢測體系使用方法簡便，快速高效；能夠縮短檢測時間，提高檢測效率。本發明所提供的檢測體系的應用范圍廣泛，具有巨大的市場價值。

技術領域

本發明屬于醫學檢測應用技術領域，尤其涉及一種檢測肺癌或腸癌中特異性T細胞分泌的細胞因子的方法。

背景技術

目前，最接近的現有技術：

細胞因子(cytokine，CK)是由免疫細胞(如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等)和某些非免疫細胞(內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等)經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。具有調節固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長以及損傷組織修復等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子等。眾多細胞因子在體內通過旁分泌、自分泌或內分泌等方式發揮作用，具有多效性、重疊性、拮抗性、協同性等多種生理特性，形成了十分復雜的細胞因子調節網絡，參與人體多種重要的生理功能。

當機體感染疾病時，一系列相關細胞因子通過協調參與機體的免疫應答過程。以結核免疫為例，結核分枝桿菌通過T淋巴細胞介導引起機體Ⅳ型超敏反應，機體發揮T細胞免疫為主，多種細胞因子協同參與的免疫應答，主要由CD4+T細胞即T輔助性1型細胞(Th1)和CD8+T細胞即T輔助性2型細胞(Th2)介導。相關細胞因子包括腫瘤壞死因子(TNF)、白介素-2(IL-2)、白介素-10(IL-10)、干擾素-γ(IFN-γ)等。

通過檢測記憶T細胞再次受特異性抗原刺激的反應程度，通常表現為分泌各類細胞因子，可以揭示機體感染疾病的狀態，這是一種可靠的檢測方法，如γ干擾素釋放實驗，是在體外檢測T細胞經結合特異性抗原刺激之后產生和釋放γ-干擾素能力的技術，借此判斷細胞介導的免疫反應。刺激患者外周血單個核細胞使T淋巴細胞產生大量γ-干擾素，然后用酶聯免疫斑點法檢測γ-干擾素濃度。

利用抗原特異性T細胞的細胞免疫反應進行病原微生物感染的體外診斷，是今年發展起來的一種新的檢測方法。通過分離新鮮全血中的外周血單核細胞并進行刺激培養，然后利用ELISPOT檢測能夠分泌IFN-γ的細胞的數量。該方法目前主要應用于結核分枝桿菌感染的診斷。目前臨床普遍采用的結核診斷主要依賴于臨床癥狀、影響學診斷和病原學診斷，對結核分枝桿菌潛伏性感染的診斷不敏感。同時，在結核病篩查過程中，直接檢測病原體或檢測結核分枝桿菌抗體的靈敏度和特異性也不理想。

綜上所述，現有技術存在的問題是：

(1)目前臨床普遍采用的結核診斷主要依賴于臨床癥狀、影響學診斷和病原學診斷，對結核分枝桿菌潛伏性感染的診斷不敏感。

(2)在結核病篩查過程中，直接檢測病原體或檢測結核分枝桿菌抗體的靈敏度和特異性也不理想。

(3)體外檢測T細胞存在檢測時間過長的缺陷。

解決上述技術問題的難度：

(1)首先是關于樣本的采集量，如何做到用最少的樣本量，達到檢測目的。

(2)其次是如何縮短整個體系的檢測時間。

(3)最后如何在最少樣本量以及最短時間內達到檢測靈敏度。

解決上述技術問題的意義：對于解決上述技術問題的意義在于，能夠實現在更短時間內，用最少量的樣本，達到檢測效果，從而提高檢測效率。