[發明專利]一種基于COI基因序列的*和貝氏*的分子鑒別方法

在審

• 申請號: 201910907879.0
• 申請日: 2019-09-25
• 公開（公告）號: CN110616270A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 李大命;張彤晴;唐晟凱;鐘立強;劉燕山;谷先坤;殷稼雯;蔣琦辰;劉小維
• 申請（專利權）人: 江蘇省淡水水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 32218 南京天華專利代理有限責任公司
• 代理人: 傅婷婷;瞿網蘭

1.一種和貝氏的分子鑒別方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)分別提取待鑒定的和貝氏基因組DNA；

(2)以提取的基因組DNA為模板，PCR擴增與貝氏的細胞色素氧化酶亞基I基因,PCR擴增使用的上游引物為F：SEQ ID NO.1，下游引物為R：SEQ ID NO.2；

(3)擴增產物純化后，直接測序，的COI基因擴增產物如SEQ ID NO.3所示,貝氏的COI基因擴增產物如SEQ ID NO.4所示；COI基因第18位點堿基是T的為貝氏，若該位點是C的為。

2.根據權利要求1所述的分子遺傳方法,其特征在于所述的PCR反應體系為50μL：80ng/μL的模板DNA 1μL，PCR緩沖液5μL，dNTP混合液4μL，每種dNTP 0.1mmol/L，10μmol/L的上、下游引物各1μL，2μL 2.5IU的Taq酶；雙蒸水36μL；所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/L MgCl₂，0.01％(g/100ml)明膠組成；PCR擴增反應程序為：94℃預變性3min，94℃變性30s，55℃退火40s，72℃延伸60s，經30個循環后再72℃延伸10min。

3.一種用于與貝氏的分子鑒別的引物對，其特征在于上游引物為F：SEQ ID NO.1，下游引物為R：SEQ ID NO.2。

4.權利要求3所述的引物對在分子鑒別與貝氏中的應用。

5.權利要求3所述的引物對在制備與貝氏分子鑒別試劑中的應用。

6.一種與貝氏分子鑒別試劑，其特征在于包含權利要求3所述的引物對。

7.根據權利要求6所述的與貝氏分子鑒別試劑，其特征在于還包括PCR緩沖液和dNTP混合液，所述的PCR緩沖液由10mmol/L Tris-HCl，pH9.0，0.5mmol/L KCl，30mmol/LMgCl₂，0.01％明膠組成。