[發明專利]一種人細小病毒和人博卡病毒雙重實時熒光PCR檢測引物、探針、試劑盒及檢測方法在審
| 申請號： | 201910905125.1 | 申請日： | 2019-09-24 |
| 公開（公告）號： | CN110628946A | 公開（公告）日： | 2019-12-31 |
| 發明（設計）人： | 楊海英;岳素文;馬寅佳;王雷;李英;張志強 | 申請（專利權）人： | 北京卓誠惠生生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 11470 北京精金石知識產權代理有限公司 | 代理人： | 劉廣南 |
| 地址： | 102206 北京市昌*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 細小病毒 定量檢測 病毒 雙重實時熒光PCR檢測 生物技術應用 快速定量 臨床樣本 假陰性 靈敏度 試劑盒 檢測 探針 引物 預防 | ||
1.一種人細小病毒和人博卡病毒雙重實時熒光PCR引物對和探針組合，其特征在于，所述引物對包括以下序列：
檢測人細小病毒的引物對由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示兩條序列組成；
檢測人博卡病毒的引物對由SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示兩條序列組成；
對應的，所述探針包括以下序列：
檢測人細小病毒的熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
檢測人博卡病毒的熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。
2.根據權利要求1所述引物對和探針組合，其特征在于，還包括檢測內對照IAC的引物對和探針，其中檢測IAC的引物對和探針具體序列如下：
檢測pET28a的引物對由SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示兩條序列組成；
檢測pET28a的熒光探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。
3.根據權利要求1或2所述引物對和探針組合，其特征在于，所述探針5’端的熒光基團為FAM、CY5、VIC或ROX中的一種，3’端的淬滅基團為BHQ1或BHQ2中的一種。
4.一種基于dUTP/UNG的人細小病毒和人博卡病毒雙重實時熒光PCR檢測的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1-3任意一項所述引物對和探針組合，以及PCR試劑。
5.根據權利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述PCR試劑包括PCR緩沖液、Hot StartDNA Polymerase、UNG酶、dN(U)TP、MgCl2和IAC模板。
6.根據權利要求5所述試劑盒，其特征在于，所述UNG酶包括UDG酶或UTG酶。
7.一種檢測人細小病毒和人博卡病毒的雙重實時熒光定量PCR方法，其特征在于，采用權利要求4-6所述試劑盒進行檢測。
8.根據權利要求7所述方法，其特征在于，其中PCR反應體系具體如下：PCR緩沖液2μL；Hot Start DNAPolymerase 0.2μL；UNG 0.1μL；dN(U)TP 0.16μL；MgCl22.4μL；引物探針混合物2μL，IAC模板1μL，DNA模板5μL，超純水補至20μL。
9.根據權利要求8所述方法，其特征在于，所述引物探針混合物中引物濃度為2-8μM，探針濃度為1-3μM。
10.根據權利要求8所述方法，其特征在于，其中PCR反應條件具體如下：50℃2min；95℃5min；95℃15s，55℃45s，循環45次。
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