[發(fā)明專利]靶向前列腺癌的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞及其制備方法和藥物

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910901543.3
• 申請(qǐng)日: 2019-09-23
• 公開（公告）號(hào): CN110564695A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張娜;杜冰;吳詩佳;劉小紅;殷宏翔;劉明耀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華東師范大學(xué);上海邦耀生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 11463 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)
• 代理人: 周文波

1.一種增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)有第一受體和第二受體；

所述第一受體為嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體具有結(jié)合前列腺癌抗原的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；

所述第二受體包括位于胞外的特異性結(jié)合TGFβ的TGFβ結(jié)合結(jié)構(gòu)域和位于胞內(nèi)的持續(xù)激活I(lǐng)L-7信號(hào)通路的IL-7激活信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述TGFβ結(jié)合結(jié)構(gòu)域選自TGFβII型受體的胞外段；

優(yōu)選地，所述TGFβII型受體的胞外段的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述IL-7激活信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域具有不依賴于配體結(jié)合的自主持續(xù)傳導(dǎo)IL-7信號(hào)的功能；

優(yōu)選地，所述IL-7激活信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域由IL-7受體突變體的跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)組成；

優(yōu)選地，所述IL-7受體突變體的跨膜區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示；

優(yōu)選地，所述IL-7受體突變體的胞內(nèi)區(qū)的氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述嵌合抗原受體還具有跨膜結(jié)構(gòu)域和共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)；

所述跨膜結(jié)構(gòu)域選自：CD8、CD28、CD33、CD37、CD8α、CD5、CD16、ICOS、CD9、CD22、CD134、CD137、CD154、CD19、CD45、CD4、和CD3ε中的一種或多種的跨膜結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域選自CD8的跨膜結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示；

優(yōu)選地，所述共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包含共刺激分子的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述共刺激分子選自：CD27、CD3ζ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d、CD2、CD4、CD5、CD28、CD30、CD40、CD134、CD137、ICOS、CD154、4-1BB、OX40、CD7、LIGHT、NKG2C和B7-H3中的一種或多種；

優(yōu)選地，所述共刺激信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)包括4-1BB的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域和CD3ζ的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域；

優(yōu)選地，4-1BB的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；

優(yōu)選地，CD3ζ的細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞，其特征在于，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域所結(jié)合的前列腺癌抗原為PSMA；

優(yōu)選地，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域選自scFv、Fab、Fab’和F(ab’)2中的任意一種；

優(yōu)選地，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域選自scFv，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示。

6.如權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞的制備方法，其特征在于，其包括：將表達(dá)所述第一受體和所述第二受體的病毒感染未經(jīng)修飾的T細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述病毒為慢病毒。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述未經(jīng)修飾的T細(xì)胞分離自需要治療前列腺癌的主體的血液。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述前列腺癌為去勢(shì)抵抗性前列腺癌。

10.一種治療前列腺癌的藥物，其特征在于，其含有作為活性成分的如權(quán)利要求1-5任一所述的增強(qiáng)型CAR-T細(xì)胞。