[發明專利]過表達ATF基因的生產乙酸丁酯的拜氏梭菌

有效

• 申請號: 201910898097.5
• 申請日: 2019-09-23
• 公開（公告）號: CN112538451B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 金明杰;方大徽;聞志強;翟睿;許召賢
• 申請（專利權）人: 南京理工大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/54;C12N15/74;C12P7/62;C12R1/145
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

1.過表達ATF1基因的生產乙酸丁酯的拜氏梭菌（Clostridium beijerinckii），其特征在于，通過在拜氏梭菌NCIMB 8052基因組中插入醇酰基轉移酶基因構建而成，醇酰基轉移酶基因的核苷酸序列如SEQ No.3所示。

2.根據權利要求1所述的拜氏梭菌的構建方法，其特征在于，具體步驟如下：

步驟1，以pXY1為質粒載體，將ATF1基因片段以酶切連接的方式裝載到以BamHI和SmaI雙酶切線性化的質粒骨架pXY1中，構建過表達質粒pYX1-ATF1；

步驟2，將過表達質粒pYX1-ATF1進行預甲基化并以電穿孔的方式導入拜氏梭菌中，篩選，測序驗證正確后獲得過表達ATF1基因的生產乙酸丁酯的拜氏梭菌。

3.根據權利要求1所述的拜氏梭菌在發酵生產乙酸丁酯中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，具體方法為：將過表達ATF1基因的生產乙酸丁酯的拜氏梭菌接種至發酵培養基中，厭氧發酵，生產乙酸丁酯。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述的發酵培養基的配方為：酵母提取物1 g/L，葡萄糖 60 g/L，K₂HPO₄?3H₂O 0.655 g/L，KH₂PO₄ 0.5 g/L，NH₄AC 2.2 g/L，半胱氨酸鹽酸鹽 1 g/L；并加入組分二10mL/L發酵培養基，組分三1 mL/L發酵培養基；組分二組分：MgSO₄?7H₂O 20.0 g/L， MnSO₄?H₂O 1 g/L，NaCl 1 g/L，FeSO₄?7H₂O 1 g/L；組分三組分：氨基苯酸1 g/L，維生素B1 1 g/L，生物素0.01 g/L。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述的發酵培養基添加10%十二烷和1%碳酸鈣。