[發(fā)明專利]波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910894290.1
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110579457B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏涵;于已芳;田鑫;張曉堅(jiān)
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C07K14/47;C07K1/14;C07K1/02
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

本發(fā)明公開了一種波形蛋白響應(yīng)型免洗熒光探針及其制備方法和應(yīng)用，所述探針由對波形蛋白具有親和力的肽段和聚集誘導(dǎo)發(fā)光型熒光基團(tuán)，以及連接肽段和熒光基團(tuán)的連接基團(tuán)組成；所述探針能特異地對波形蛋白產(chǎn)生熒光響應(yīng)，具有操作簡便、免洗、檢測成本低、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等優(yōu)勢；且所述探針能作為檢測試劑用于上皮?間質(zhì)轉(zhuǎn)化類型的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織的特異性檢測，靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測領(lǐng)域，特別涉及波形蛋白響應(yīng)型免洗熒光探針及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

波形蛋白是上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程的經(jīng)典生物標(biāo)志物。EMT是正常胚胎發(fā)育中組織形態(tài)形成階段的關(guān)鍵分化轉(zhuǎn)化過程；而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中，EMT被認(rèn)為是腫瘤干細(xì)胞獲得侵襲性、轉(zhuǎn)移能力和耐藥性的重要潛在原因。因此在多種類型的腫瘤中，具有EMT特征與腫瘤細(xì)胞的存在與腫瘤耐藥、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)具有密切關(guān)系。目前，有研究報(bào)道化學(xué)小分子如FiVe1 和Withaferin A、核酸適配體如NAS-24和AptVim等對波形蛋白的親和或抑制作用。

鑒于EMT特征腫瘤細(xì)胞在癌癥病理中的重要作用，一些基于EMT特征細(xì)胞表面標(biāo)志物的抗體免疫檢測方法被開發(fā)以用于該類型腫瘤細(xì)胞的檢測。然而，這些方法涉及操作步驟較多，重復(fù)性欠佳；且EMT特征細(xì)胞表面標(biāo)志物抗體的價(jià)格不菲，檢測成本較高。化學(xué)熒光探針是一種簡便、靈敏地檢測/成像多種興趣靶標(biāo)的有效手段。但是，常規(guī)的熒光探針往往因非特異性結(jié)合或過量的探針而產(chǎn)生熒光背景，導(dǎo)致檢測靈敏度度降低或產(chǎn)生假陽性結(jié)果，因此需要對染色樣本進(jìn)行多次洗滌操作，而這亦會對檢測樣本產(chǎn)生非預(yù)期的干擾和損傷。現(xiàn)有技術(shù)現(xiàn)在不存在能夠特異、準(zhǔn)確、快速、簡便的測定方法，均存在一定的缺陷，不能滿足特異性和準(zhǔn)確度的要求。因此，需要開發(fā)一種簡便、經(jīng)濟(jì)、高效和準(zhǔn)確的EMT特征腫瘤細(xì)胞特異響應(yīng)型免洗熒光探針。

發(fā)明內(nèi)容

針對本領(lǐng)域目前存在的問題，本發(fā)明提供了一類簡便、免洗、高靈敏度、特異、準(zhǔn)確度高的波形蛋白響應(yīng)型熒光探針及其制備方法和應(yīng)用，能夠滿足本領(lǐng)域的要求，對產(chǎn)品的開發(fā)和制備等具有重要現(xiàn)實(shí)意義。

本發(fā)明提供以下技術(shù)方案。

本發(fā)明提供了一類波形蛋白響應(yīng)型免洗熒光探針，包括：聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光基團(tuán)和對波形蛋白親和的肽段，以及兩者間的連接基團(tuán)。

本發(fā)明提供了一類波形蛋白響應(yīng)型免洗熒光探針的制備方法。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光基團(tuán)為四苯乙烯。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，對波形蛋白親和的肽段包含如下序列SEQ ID NO:1：CVNTANST。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光基團(tuán)和對波形蛋白親和肽段之間的連接基團(tuán)為6-馬來酰亞胺己酸。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，一個(gè)波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針分子中，波形蛋白親和的氨基酸肽段和連接基團(tuán)的數(shù)量各為2，肽段的相對位置為四苯乙烯雙鍵的順式或反式。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了所述波形蛋白特異響應(yīng)型熒光探針在制備對具有EMT特征的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織的成像檢測試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益效果是：

1、本發(fā)明的核心在于結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和制備工藝，以克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的特異性、準(zhǔn)確度、靈敏度、便捷性、可操作性等問題。本發(fā)明針對具體的波形蛋白的結(jié)構(gòu)來設(shè)計(jì)探針的組成。基于聚集誘導(dǎo)發(fā)光基團(tuán)和波形蛋白親和肽段構(gòu)建了EMT特征腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織的特異性熒光成像檢測探針，其中采用連接基團(tuán)進(jìn)行連接，該類型探針合成簡便，操作簡單，成本低，具有較目前已有的波形蛋白免疫檢測方法具有簡便快捷、檢測樣本免洗、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)勢。