[發(fā)明專利]波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910894290.1
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110579457B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏涵;于已芳;田鑫;張曉堅
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C07K14/47;C07K1/14;C07K1/02
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張曉萍

1.波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針，其特征在于：包括聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光基團(tuán)和對波形蛋白親和的肽段，以及連接基團(tuán)，所述聚集誘導(dǎo)發(fā)光熒光基團(tuán)為1,2-二苯基-1,2-二(4-胺基苯)乙烯，所述對波形蛋白親和的肽段包含序列SEQ ID NO:1，所述連接基團(tuán)為6-馬來酰亞胺己酸。

2.如權(quán)利要求1所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針，其特征在于：所述對波形蛋白親和的肽段和連接基團(tuán)的數(shù)量各為2，結(jié)構(gòu)為順式或反式。

3.一種如權(quán)利要求1所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：

（1）將 1,2-二苯基-1,2-二(4-胺基苯)乙烯溶于溶劑中，6-馬來酰亞胺己酸和 EEDQ加入反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)過夜，產(chǎn)物進(jìn)行分離，得到cis-TPE-1和trans-TPE-2；

（2）將肽段溶解于乙腈/水混合溶液中，調(diào)節(jié)至酸性，分別將上述步驟中得到的cis-TPE-1和trans-TPE-2 溶于 N,N-二甲基甲酰胺，將溶液滴加至前述乙腈/水混合溶液，室溫攪拌，然后調(diào)節(jié)至堿性并繼續(xù)室溫攪拌，液相分離純化。

4.一種如權(quán)利要求3所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針的制備方法，其特征在于：

步驟（1）為將200 mg 1,2-二苯基-1,2-二(4-胺基苯)乙烯溶于10 -20 ml二氯甲烷中，350 mg 6-馬來酰亞胺己酸和408 mg EEDQ加入反應(yīng)液中，室溫反應(yīng)過夜，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋干溶劑，石油醚：乙酸乙酯1:1過硅膠柱分離，得到cis-TPE-1和trans-TPE-2。

5.一種如權(quán)利要求3所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針的制備方法，其特征在于：

步驟（2）為將16 mg長度為8AA的肽段CVNTANST溶解于10-15 ml體積比為1:1的乙腈/水混合溶液中，滴加稀鹽酸調(diào)pH=4，分別將上述步驟中得到的cis-TPE-1和trans-TPE-2 7.5mg溶于1-3 ml N,N-二甲基甲酰胺，將所述溶液滴加至前述乙腈/水混合溶液，室溫攪拌1-1.5 h，然后滴加稀氨水調(diào)調(diào)pH=8并繼續(xù)室溫攪拌3 h，液相分離純化。

6.如權(quán)利要求1所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針在制備檢測人肺腺癌細(xì)胞試劑中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求1所述的波形蛋白特異響應(yīng)性熒光探針在制備檢測EMT特征的腫瘤組織試劑中的應(yīng)用。