[發明專利]一種檢測尿嘧啶糖基化酶的化學發光生物傳感器及其制備方法與應用有效
| 申請號： | 201910891123.1 | 申請日： | 2019-09-20 |
| 公開（公告）號： | CN110607351B | 公開（公告）日： | 2022-11-01 |
| 發明（設計）人： | 王玉;張雪;劉素;黃加棟;宋曉蕾;李莎莎;王敬鋒;王海旺;孫文玉;王業茹 | 申請（專利權）人： | 濟南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/48 | 分類號： | C12Q1/48;G01N21/76 |
| 代理公司： | 濟南泉城專利商標事務所 37218 | 代理人： | 李桂存 |
| 地址： | 250022 山東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 檢測 嘧啶 糖基化酶 化學 發光 生物 傳感器 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種檢測尿嘧啶糖基化酶的化學發光生物傳感器，其特征在于，包括以下原料：SA鏈、UP探針、BS鏈、1×Cutsmart緩沖液、內切酶 IV、標記好G-HP 及linker鏈的球形核酸SNA、尿嘧啶糖基化酶UDG、血紅素、魯米諾、過氧化氫；
所述的UP探針的堿基序列為AGTCAGTATGCACUCGTGTTAAGCGTGSA；
所述的SA鏈的堿基序列如SEQ No.2所示；
所述的BS鏈的堿基序列如SEQ No.3所示；
所述的linker鏈的堿基序列如SEQ No.4所示；
所述的G-HP的堿基序列如SEQ No.5所示；
所述的G-HP的堿基序列中5’端第十八個堿基為四氫呋喃脫堿基位點；
SA鏈、UP探針、 BS鏈加入到1×Cutsmart緩沖液中形成三通路體系；
所述的化學發光生物傳感器的制備方法，包括以下步驟：
（1）納米金的制備；
（2）標記好G-HP 及linker鏈球形核酸SNA的制備；
（3）化學發光反應；
所述的步驟（2）的標記好G-HP 及linker鏈球形核酸SNA的制備方法，包括以下步驟：
S1調整納米金溶液濃度為5nM；
S2將G-HP 及linker鏈按照VG-HP:Vlinker=20:1加入到步驟S1的納米金溶液中，加入PB緩沖液，分批加入 PBS，調整溶液中NaCl的濃度為0.3 M；
S3離心去掉未被標記上的DNA鏈；
S4將離心后的沉淀物重新溶解超純水里，置于4℃備用；
所述的步驟（3）的過程為：
J1將SA鏈、UP探針、 BS鏈加入到1×Cutsmart緩沖液中形成三通路體系；
J2將內切酶 IV、標記好G-HP 及linker鏈的球形核酸SNA、尿嘧啶糖基化酶UDG加入到J1制備的三通路體系中；
J3向J2得到的體系中加入血紅素、魯米諾，形成G-四聯體球形核酸酶；
J4向J3得到的體系中加入過氧化氫立即用于化學發光信號的檢測，化學發光信號采集時間間隔是1.5s，化學發光光譜測量范圍是350nm到550nm。
2.權利要求1所述的化學發光生物傳感器用于制備尿嘧啶糖基化酶的早期檢測的試劑中的用途。
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