[發明專利]基于light-up銀簇探針的熒光生物傳感器及其在miR-122檢測中的應用

在審

• 申請號: 201910889780.2
• 申請日: 2019-09-20
• 公開（公告）號: CN110564817A
• 公開（公告）日: 2019-12-13
• 發明（設計）人: 王玉;張雪;劉素;黃加棟;宋曉蕾;李莎莎;王敬鋒;王海旺;孫文玉;王業茹
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 37218 濟南泉城專利商標事務所
• 代理人: 李桂存

1.基于light-up銀簇探針的熒光生物傳感器，其特征在于，包括以下原料：IS鏈、GrHP探針、BS鏈、銀簇、緩沖液、miR-122；

所述的GrHP堿基系列如SEQ No.1所示；

所述的IS堿基系列如SEQ No.2所示；

所述的BS堿基系列如SEQ No.3所示；

所述的AgNC-SP堿基系列如SEQ No.4所示；

所述的miR-122堿基系列如SEQ No.5所示。

2.權利要求1所述的熒光生物傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）銀納米簇的制備；

（2）均相中銀納米簇和三通路結構發生鏈置換反應。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（1）的過程為：

將15μL，100μM AgNC-SP和4.5μL，2mM硝酸銀的混合溶液加入到76μL，20 mM，pH6.5磷酸鹽緩沖液中并于4℃反應15 min；之后，將4.5μL 2mM的硼氫化鈉加入到體系中，于暗處放置6小時以上，既得銀納米簇。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（2）的過程為：

將IS鏈、GrHP探針、BS鏈及步驟（1）的銀納米簇加入到緩沖液中在37℃下反應半小時使其形成三通路結構，之后將miR-122加入到三通路體系中反應；最后，向反應體系中加入超純水混合用熒光分光光度計進行檢測。

5.根據權利要求2或4所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟（2）的過程為：

將IS鏈、 GrHP探針、BS鏈及步驟（1）的銀納米簇加入到1×緩沖液中在37℃下反應半小時使其形成三通路結構，之后將miR-122加入到三通路體系中反應30min；最后，向反應體系中加入50μL超純水混合用熒光分光光度計進行檢測；熒光波譜測量條件：激發波長為565nm, 激發和發射的狹縫均為10nm。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的緩沖溶液為：50mM NaCl，10mMTris-醋酸，10mM MgCl₂，100μg·mL^-1 BSA；25℃，pH7.9。

7.權利要求1所述的熒光生物傳感器在miR-122檢測中的應用。