[發明專利]一種改善透明質酸鈉色度的生產方法

在審

• 申請號: 201910885701.0
• 申請日: 2019-09-19
• 公開（公告）號: CN110592163A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 徐寶順
• 申請（專利權）人: 南京喬康生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12N1/20;C08B37/08;C12R1/46
• 代理公司: 32242 江蘇銀創律師事務所
• 代理人: 何紅梅

1.一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，包括如下步驟：

A．將產透明質酸的菌種在相應的培養基中和適宜的培養條件下進行培養發酵，得到含有透明質酸的發酵液；

B．將透明質酸發酵液提取純化，包括以下步驟：

B1．前沉淀：發酵液中加入乙醇進行前沉淀；

B2．溶解：沉淀物用氯化鈉水溶液溶解，加入氫氧化鈉調節pH為8.9-11.2，并加入質量體積比為0.08-0.8‰的EDTA；

B3．活性炭脫色：將溶解液加入活性炭脫色，得到脫色液；

B4．過濾：將脫色液加入珍珠巖，攪拌均勻后，壓入板框過濾機過濾一遍后，過濾液調pH為9.3-9.5；

再加入珍珠巖并攪拌均勻后，壓入精濾機過濾第二遍，得到精制過濾液；

B5．后沉淀：將濾液加入乙醇至酒精度為50%-65%沉淀透明質酸鈉，靜置半小時后將上清液打入廢酒精罐，得到沉淀物；

B6．脫水離心：將沉淀物先用74-89%的乙醇進行第一次脫水，再用80-96%的乙醇進行第二次脫水，脫水后酒精度數到 90% 以上，靜置2小時后進行離心得到沉淀；

B7．干燥：將上述沉淀干燥，得到粉末狀透明質酸鈉。

2.根據權利要求1所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟A中包括以下操作：

A1．將菌種在斜面菌種培養基上活化；

A2．將活化后的菌種接種至種子培養基，培養12-24 h，制備種子液；

A3．將種子液接種至擴大培養基中進行擴大培養，得到擴大培養液；

A4．將擴大培養液接種至裝有發酵培養基的發酵罐中通風發酵培養，得到發酵液。

3.根據權利要求1所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟B2中溶解用氯化鈉水溶液的體積為沉淀物的2-3倍, pH為9.5-11，加入EDTA的質量體積比為0.1-0.3‰。

4.根據權利要求1所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟B3中所用活性炭添加量為5-7g/L，溫度為65-75℃，脫色時間為45-50min。

5.根據權利要求1所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟B5中所用乙醇的體積為濾液的3-5倍。

6.根據權利要求1所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟B6中所述脫水方法為：第一次脫水使用84-87%的乙醇進行脫水8-9次，第二次脫水使用85-92%的乙醇脫水3-4次。

7.根據權利要求2所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟A2中的種子培養基的組成為(每L)：葡萄糖8-13g，酵母粉6-9g，蛋白胨10-14g，磷酸氫二鉀1-3g，硫酸鎂1-3g，滅菌溫度為121℃，滅菌時間為25min。

8.根據權利要求7所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述培養的溫度為34-38℃，用30%的NaOH溶液控制pH 6.0-8.0，通風培養8-13h。

9.根據權利要求2所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟A4中發酵培養基組成為(每L)：葡萄糖92-109g，酵母粉3.2-4.5g，蛋白胨10-14g，磷酸氫二鉀1.5-3g，硫酸鎂1-3g；

其中酵母粉、蛋白胨、磷酸氫二鉀用純水溶解至占發酵液總體積的14-24%，滅菌溫度為121℃，滅菌時間為25min，葡萄糖、硫酸鎂用純水溶解至占發酵液總體積的65-80%，滅菌溫度為121℃，滅菌時間為25min。

10.根據權利要求2所述的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法，其特征在于，所述步驟B3中所述活性炭源自煤炭、木材、果殼、椰殼，以藥晶激活或水蒸氣活化方法制備得到；

可以是粉末活性炭、顆粒狀活性炭，可以是干式活性炭、濕式活性炭；

優選地，所述活性炭為水蒸氣活化方法制備的源自木材的活性炭，性狀為粉末狀。