[發明專利]一種改善透明質酸鈉色度的生產方法

在審

• 申請號: 201910885701.0
• 申請日: 2019-09-19
• 公開（公告）號: CN110592163A
• 公開（公告）日: 2019-12-20
• 發明（設計）人: 徐寶順
• 申請（專利權）人: 南京喬康生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;C12N1/20;C08B37/08;C12R1/46
• 代理公司: 32242 江蘇銀創律師事務所
• 代理人: 何紅梅

本發明公開了一種改善透明質酸鈉色度的生產方法。本發明在發酵液純化的過程中增加水用量的體積進行溶解帶走更多雜質，并加活性炭吸附進行脫色除雜，得到的粗品進行兩次過濾后可以去除活性炭，同時改進乙醇后沉淀和乙醇洗脫工藝，離心干燥得到透明質酸粉末。改進后的生產工藝，可以去除更多的雜質，生產出的透明質酸鈉更純凈，色澤更白，且配置的水溶液澄清透明。

技術領域

本發明涉及透明質酸生產技術領域，特別是涉及一種改善透明質酸鈉色度的生產方法。

背景技術

透明質酸，除了作為化妝品的保濕劑以外，還用作眼科、骨科、皮膚科等的藥劑制品。透明質酸可以從動物組織，例如，可以從雞的雞冠、牛眼玻璃體等的提取物制造而得，但因為作為雜質的硫酸軟骨素等的混入，或因組織內含有透明質酸酶等使其容易被低分子量化，因此發展出了將具有透明質酸生產能力的微生物進行培養，從培養液中制造透明質酸的方法（發酵法）（非專利文獻 1 以及專利文獻 1）。

使用提取法或發酵法制造得到的透明質酸中，存在蛋白質或致熱源等雜質，因而人們對分離去除雜質得到高純度透明質酸鈉制品的方法進行了研究。特別是制造的初期階段中的雜質的去除，能夠減輕之后的提純工序的負荷，有望開發出能夠作為藥劑制品使用的高純度制品的方法。作為這樣的例子，公開了例如在發酵液中加入乙醇等有機溶劑使得透明質酸析出與雜質分離的提純法，或使用陰離子交換樹脂從發酵液中去除致熱源或蛋白質等的透明質酸提純法（專利文獻 2）

非專利文獻 1 ：Journal of General Microbiology,85,372-375,1976

專利文獻 1 ：日本國專利公報“特公平 4-12960 號公報”

專利文獻 2 ：日本國專利公報“特開昭 63-12293 號公報”

無論使用何種方法，其目的都是去除發酵液中的蛋白、核酸、細胞壁殘留等雜質，提高透明質酸的純度和生產效率?，F有的技術除雜效果不明顯，得到的透明質酸鈉溶液澄清度非常不穩定，水溶液透明度不一致，會變黃或者渾濁。本發明的主要目的是通過調整溶解用水和乙醇用量、調節合適的PH等方法，優化透明質酸鈉發酵液的提取工藝，提高其色度和純度。

發明內容

本發明提供一種改善透明質酸鈉色度的生產方法。本發明公開了一種改善透明質酸鈉色度的生產方法。本發明在發酵液純化的過程中增加水用量的體積進行溶解帶走更多雜質，并加活性炭吸附進行脫色除雜。得到的粗品進行兩次過濾后可以去除活性炭，再增加乙醇用量進行后沉淀，并增加乙醇洗脫次數，離心干燥得到透明質酸粉末。改進后的生產工藝，可以去除更多的雜質，生產出的透明質酸鈉更純凈，色澤更白，且配置的水溶液澄清透明。

為達到上述目的，本發明的一種改善透明質酸鈉色度的生產方法技術方案為：將得到的發酵液純化的過程中增加水用量的體積進行溶解帶走更多雜質，并加活性炭吸附進行脫色除雜，包括如下步驟：

A．制備透明質酸發酵液：將產透明質酸的菌種在相應的培養基中和適宜的培養條件下進行培養發酵，得到含有透明質酸的發酵液。包括以下操作步驟：

A1．將菌種在斜面菌種培養基上活化；

A2．將活化后的菌種接種至種子培養基，培養12-24 h，制備種子液；

A3．將種子液接種至擴大培養基中進行擴大培養，得到擴大培養液；

A4．將擴大培養液接種至裝有發酵培養基的發酵罐中通風發酵培養，得到發酵液。

B．將透明質酸發酵液提取純化，包括以下操作步驟：

B1．前沉淀：發酵液中加入乙醇進行前沉淀；

B2．溶解：沉淀物用氯化鈉水溶液溶解，加入氫氧化鈉調節pH為8.9-11.2，并加入質量體積比為0.08-0.8‰的EDTA；