[發明專利]NDUFA13在制備自發性肝炎-肝纖維化動物模型、及制備藥物中的應用

有效

• 申請號: 201910879009.7
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN111019970B
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 黃軼;王欣;薛炳乾;葉庭菠;李銳;徐小惠;黃道超;曾欣
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學附屬兒童醫院
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;G01N33/68
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 文巍

本發明提供NDUFA13及其基因作為肝炎或肝纖維化藥物或診斷靶點的用途。本發明的研究結果顯示，NDUFA13及其基因與肝炎或肝纖維化密切相關，其為后期肝炎或肝纖維化藥物和診斷試劑的研發提供了一個全新的靶點以及新的診斷、預防、治療手段和思路。同時，本發明首次構建NDUFA13supgt;?flox/?/supgt;Alb?Cre小鼠品系，該肝特異性NDUFA13雜合敲除小鼠可穩定出現非感染性自發性肝臟炎癥，并在后期進展為肝纖維化表型，可作為自發性肝炎?肝纖維化小鼠模型，應用于肝臟炎癥?肝纖維化機制研究及新藥研發評價等。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別涉及NDUFA13在制備藥物、診斷試劑及構建動物模型的應用。

背景技術

慢性肝病是一類臨床慢性肝臟疾病譜的總稱，包括各種誘導形成的肝炎、肝硬化以及肝癌等，其發病率與死亡率位居世界前列，我國約3億人受到肝病影響，每年肝硬化引起全球約120萬人死亡，嚴重危害人類健康。許多因素與慢性肝病發生發展有關如病毒感染、自身免疫反應、過敏反應、藥物治療、輻射等，這些因素可誘導慢性肝病的“肝炎-肝硬化-肝癌”病理三部曲進程，其中肝纖維化(Liver?fibrosis，LF)作為慢性肝病進展的關鍵階段，是眾多慢性肝病進展為肝硬化的共同的病理學改變，若不及時有效干預，將導致不可逆的肝硬化甚至肝癌。由于目前尚無安全有效的臨床干預手段，亦缺乏直接預防或逆轉纖維化的治療藥物，使得肝纖維化成為長期以來慢性肝病臨床治療的難點。

由于醫學倫理限制，使得疾病動物模型成為模擬人類疾病發生發展研究的重要手段，也是各種干預措施實施的重要實驗對象。現階段，模擬人肝纖維化病理進程的疾病動物模型目前主要集中于非遺傳性與遺傳性誘導兩個方面。一是化學誘導、飲食誘導、感染因素誘導以及外科誘導等非遺傳性肝纖維化模型。如四氯化碳、二甲基亞硝胺以及酒精等化學誘導、高脂飲食誘導、外科處理造成的膽管阻塞性誘導肝纖維化模型。而這些誘導模型具有較大局限性。如這些誘導物作用與肝細胞的具體分子靶點大多不清楚；各類模型在造模周期、途徑及生物安全等方面均具有一定的局限性，如化學性模型死亡率較高，纖維化程度不易控制且藥物具有致癌性等，酒精性與免疫性模型周期較長，膽管阻塞性模型存在手術復雜、模型長期存活率較低等系列問題。二是基因敲除缺陷遺傳性誘導模型。如多藥耐藥相關蛋白2(Mdr2)基因敲除缺陷小鼠，可表現為原發性硬化性膽管炎與膽汁型肝纖維化表型，并在短期的4-6周齡時發生肉眼可見的腫瘤結節。又如ALMS1?Fat?ausi基因突變小鼠，經高脂長時間飼養誘導，可發展為不可逆性肝纖維化表型。由于上述兩種基因工程鼠均為全身性基因突變，尤其是上述兩種基因在人類肝纖維化病理過程中是否存在缺陷尚不明了，且嚴重程度上以及病理進展與人肝纖維化具有較大差異，故在臨床轉化應用中存在缺陷。因此，開發一種與人肝纖維化疾病臨床緊密相關的肝纖維化小鼠模型，不僅可極大豐富肝纖維化模型，為肝臟疾病的治療與干預提供一種理想的實驗動物模型。

線粒體呼吸鏈復合體I結構蛋白NDUFA13(NADH?dehydrogenase(ubiquinone)Ⅰalpha?subcomplex?13)，又稱為GRIM-19蛋白，是線粒體呼吸鏈(MRC)復合體Ⅰ的必須組份，其基因主要定位于人19號染色體19p13.2，編碼144個氨基酸的蛋白質分子，分子量約為16kDa，主要定位于線粒體內膜，亦有少部分存在于細胞質與細胞核中，在線粒體MRC復合體膜電位、線粒體呼吸氧化磷酸化功能維持、細胞凋亡及多種信號轉導調控中具有重要作用。近年研究發現NDUFA13作為一種抑癌基因在結直腸癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、膠質瘤等多種腫瘤表達缺失，與腫瘤發生發展相關。也有研究報道NDUFA13缺失與“炎癥-萎縮-腸上皮化生”的人類慢性萎縮性胃炎病理進程密切相關。盡管NDUFA13在肝癌中顯著缺失，但NDUFA13與肝癌前期病理進程如肝炎、肝纖維化、肝硬化等的關系并不清楚。

發明內容

本發明首次公開了NDUFA13基因缺陷與肝炎及肝纖維化的病理進程相關，其肝臟的缺失可直接誘導自發性的非感染性肝炎，并可進一步進展為肝纖維化。