[發明專利]一種葉綠體DNA的富集方法在審
| 申請號： | 201910876698.6 | 申請日： | 2019-09-17 |
| 公開（公告）號： | CN110734907A | 公開（公告）日： | 2020-01-31 |
| 發明（設計）人： | 林芹;龍歡;袁方;陶曄;曾亮;林愛婷 | 申請（專利權）人： | 上海凌恩生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 31260 上海晨皓知識產權代理事務所(普通合伙) | 代理人： | 成麗杰 |
| 地址： | 201800 上海市嘉*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 葉綠體DNA 測序 富集 細胞核DNA 分子生物學技術 植物基因組DNA 甲基化位點 測序數據 植物細胞 準確度 蛋白A 磁珠 修飾 媒介 | ||
1.一種葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，包括：
(1)提取植物基因組DNA；
(2)使蛋白A修飾的磁珠與MBD2-Fc蛋白結合，得到處理后的磁珠；
(3)將所述植物基因組DNA加入所述處理后的磁珠中，混勻，對混合物進行室溫下孵育；
(4)對孵育后的混合物離心，于磁力架上靜置，細胞核DNA通過與磁珠上的MBD2-Fc蛋白結合而附著到磁珠上，葉綠體DNA保留在上清液中，取上清液；
(5)使用磁珠對所述上清液中的葉綠體DNA進行回收，即得到富集后的葉綠體DNA。
2.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(1)中，在提取植物基因組DNA時，保證所述植物基因組DNA的完整性，并且完全去除植物蛋白。
3.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(1)中，提取植物基因組DNA的方法為：對待提取樣本使用蛋白酶K處理，然后用酚氯仿或酒精提取。
4.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(1)中，還包括對提取的植物基因組DNA進行質量檢測的步驟和/或對提取的植物基因組DNA進行純化的步驟。
5.根據權利要求4所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，所述對提取的植物基因組DNA進行質量檢測的步驟包括濃度檢測、有無降解檢測、雜質檢測中的一種或多種。
6.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(2)中，所述蛋白A為從A型金黃色葡萄球菌分離得到的細胞壁蛋白。
7.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(2)中，使蛋白A修飾的磁珠與MBD2-Fc蛋白結合的方法為：取蛋白A修飾的磁珠與MBD2-Fc蛋白混合，室溫中孵育10～15分鐘。
8.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(2)中還包括除去未結合的MBD2-Fc蛋白的步驟。
9.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(3)中，加入到所述處理后的磁珠中的植物基因組DNA的總量不超過1μg。
10.根據權利要求1所述的葉綠體DNA的富集方法，其特征在于，步驟(3)中，所述室溫下孵育的時間為15～20分鐘。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海凌恩生物科技有限公司，未經上海凌恩生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201910876698.6/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
