[發明專利]用于蛋白富集表達、胞內定位的新型標簽蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201910875555.3
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110551193B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 宋俊祎;吳文健;胡碧茹
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍國防科技大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/85
• 代理公司: 長沙國科天河知識產權代理有限公司 43225
• 代理人: 邱軼

1.用于蛋白富集表達、胞內定位的新型標簽蛋白的應用，其特征在于：利用蛋白表達標簽RA1自身具有的強大自組裝特性，協助目的蛋白在表達之后、于宿主細胞內形成大型的蛋白富集體顆粒，利于后續的分離純化，由于RA1自身所具有的細胞內空間定位能力，將目的蛋白富集體顆粒束縛在宿主細胞特定的空間位置之內，從而有效降低外源蛋白表達對宿主細胞自身正常代謝的有害影響，提高最終的蛋白產率，具體包括以下步驟：

(a)提供一種表達載體，在基因表達載體的開放閱讀框內，從5’至3’段依次包含以下可操作性連接元件：eGFP的編碼基因，RA1的編碼基因；

(b)將(a)的表達載體轉入宿主細胞，從而表達eGFP，RA1標簽；

(c)提供一組eGFP與RA1標簽構成的重組蛋白，所述重組蛋白含有eGFP與RA1功能區域；

(d)eGFP在RA1功能區域的作用下發揮細胞內富集與空間定位，優化分離純化過程；

所述RA1，作為標簽蛋白，來源于烏賊虹細胞的膜上蛋白--反光蛋白A1，即ReflectinA1，所述反光蛋白A1的氨基酸序列如序列表2所示。

2.根據權利要求1所述的用于蛋白富集表達、胞內定位的新型標簽蛋白的應用，其特征在于：

步驟(a)所述的表達載體，是指本領域熟知的細菌質粒、酵母質粒；

所述的RA1的編碼基因，在不改變其編碼的蛋白序列的前提下，根據表達體系的需求進行密碼子優化。