[發明專利]一種含有激活因子的神經再生納米纖維的制備方法

有效

• 申請號: 201910874194.0
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110665066B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 湯佳鵬;葛彥;胡佳楠;朱俐
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: A61L27/54
• 分類號: A61L27/54;A61L27/20;A61L27/18
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種等離子體表面接枝神經生長因子的納米纖維的制備方法，包括(1)將一定量殼聚糖和聚氧化乙烯完全溶解于90％乙酸溶液，攪拌均勻，得到紡絲液；(2)采用紡絲液進行靜電紡絲，得到殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維；(3)將殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維用DMEM培養基洗滌至中性，烘干之后經等離子處理器處理活化；(4)取小鼠腫瘤細胞液氮研磨后，經過0.22μm孔徑膜過濾去除未破碎細胞，并用DNA酶消化后得到激活因子；(5)活化的納米纖維浸泡在含有神經生長因子和激活因子的DMEM培養基中進行負壓閃爆，之后進行接枝反應，離心凍干。這種納米纖維是一種能夠誘導神經損傷部的再生的醫療用材料，可以用于制造神經再生組件，能夠促進神經元的生長。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程領域，尤其涉及一種含有激活因子的神經再生納米纖維的制備方法。

背景技術

針對由外傷或腫瘤切除等引起的神經損傷的治療，經常采取將已切斷的神經彼此直接縫合的神經縫合、或者采集患者自身的健康神經并將其移植到損傷部的自體神經移植等方法。然而，在直接縫合神經的方法中，有時會施加張力而殘留知覺異常或疼痛，自體神經移植則存在以下問題：犧牲了健康部位的神經，并且，神經采集部有時會出現疼痛或麻木等。

從1980年代初期開始，人們嘗試著使用生物相容性材料連接末梢神經的斷裂部位以使神經再生，對于直線狀的神經缺損部，存在著幾種用于神經再生的器具。但是由于神經細胞的特殊性，尤其是神經元生長與增殖的營養條件非常苛刻，所以一直以來無法高效實現周圍神經組織再生。

很多研究都發現，包括前列腺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、結腸癌和皮膚癌的腫瘤中，都能觀察到新生神經纖維(神經元的軸突延伸)、神經纖維的滲透和擴展。這個過程有點兒類似腫瘤組織旁的血管，往腫瘤里面長毛細血管。而這些長進來的神經纖維，會釋放一些神經信號，促進腫瘤的生長和轉移。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種含有激活因子的神經再生納米纖維的制備方法，本發明制備方法大大提高了神經生長因子與纖維的結合率，負載量更大，制得的神經再生納米纖維能夠更好地促進神經元生長及神經損傷后的再生。

為解決上述問題，本發明提供了一種含有激活因子的神經再生納米纖維的制備方法，包括如下步驟：

S1：將殼聚糖和聚氧化乙烯完全溶解于乙酸溶液，攪拌均勻，得到紡絲液；

S2：采用所述紡絲液進行靜電紡絲，得到殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維；

S3：將所述殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維用DMEM培養基洗滌至中性，烘干之后進行等離子處理活化得到活化納米纖維；

S4：取小鼠腫瘤細胞液氮研磨后，經過0.22μm孔徑膜過濾去除未破碎細胞，并用DNA酶進行消化反應，得到激活因子；

S5：將所述活化納米纖維浸泡在含有神經生長因子和所述激活因子的DMEM培養基中進行負壓閃爆，之后進行接枝反應，離心凍干，得含有激活因子的神經再生納米纖維。

優選的，步驟S1中，所述殼聚糖的粘均分子量為5.0×10⁵，脫乙酰度為80～85％；所述聚氧化乙烯的平均分子量為1.0×10⁶；所述乙酸溶液的濃度為90v/v％。

優選的，所述紡絲液中殼聚糖和聚氧化乙烯的總濃度為10～30g/L，其中，殼聚糖與聚氧化乙烯的質量比為1:1～4。

優選的，步驟S4中，所述小鼠腫瘤細胞包括Colon 26小鼠結腸癌細胞、KLN 205小鼠肺癌鱗癌細胞、LL/2小鼠Lewis肺癌細胞、Neuro-2a小鼠腦神經母細胞瘤、B16小鼠黑色素瘤細胞、J558小鼠多發性骨髓瘤細胞和RM1小鼠前列腺癌細胞中的一種。

優選的，步驟S4中，所述DNA酶與所述小鼠腫瘤細胞的細胞量的比為400～5000U:1×10⁴個。