[發(fā)明專利]一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910874194.0
• 申請(qǐng)日: 2019-09-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110665066B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯佳鵬;葛彥;胡佳楠;朱俐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): A61L27/54
• 分類號(hào): A61L27/54;A61L27/20;A61L27/18
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：將殼聚糖和聚氧化乙烯完全溶解于乙酸溶液，攪拌均勻，得到紡絲液；

S2：采用所述紡絲液進(jìn)行靜電紡絲，得到殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維；

S3：將所述殼聚糖/聚氧化乙烯納米纖維用DMEM培養(yǎng)基洗滌至中性，烘干之后進(jìn)行等離子處理活化得到活化納米纖維；

S4：取小鼠腫瘤細(xì)胞液氮研磨后，經(jīng)過(guò)0.22μm孔徑膜過(guò)濾去除未破碎細(xì)胞，并用DNA酶進(jìn)行消化反應(yīng)，得到激活因子；

S5：將所述活化納米纖維浸泡在含有神經(jīng)生長(zhǎng)因子和所述激活因子的DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行負(fù)壓閃爆，之后進(jìn)行接枝反應(yīng)，離心凍干，得含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S1中，所述殼聚糖的粘均分子量為5.0×10⁵，脫乙酰度為80～85％；所述聚氧化乙烯的平均分子量為1.0×10⁶；所述乙酸溶液的濃度為90v/v％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，所述紡絲液中殼聚糖和聚氧化乙烯的總濃度為10～30g/L，其中，殼聚糖與聚氧化乙烯的質(zhì)量比為1:1～4。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S4中，所述小鼠腫瘤細(xì)胞包括Colon 26小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞、KLN 205小鼠肺癌鱗癌細(xì)胞、LL/2小鼠Lewis肺癌細(xì)胞、Neuro-2a小鼠腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤、B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞、J558小鼠多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞和RM1小鼠前列腺癌細(xì)胞中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S4中，所述DNA酶與所述小鼠腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞量的比為400～5000U:1×10⁴個(gè)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S4中，所述消化反應(yīng)溫度30～40℃，消化反應(yīng)的時(shí)間2～4h。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S5中，所述含有神經(jīng)生長(zhǎng)因子和所述激活因子的DMEM培養(yǎng)基中還含有細(xì)胞培養(yǎng)添加劑，神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF的濃度為40～80mg/L，細(xì)胞培養(yǎng)添加劑的濃度為40～80mg/L，激活因子濃度以蛋白計(jì)為90～400mg/L。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S5中，接枝反應(yīng)的浸泡浴比為1:100～300，浸泡溫度為0～4℃，浸泡時(shí)間為12～24h。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S5中，負(fù)壓閃爆的真空度為0.100～0.024mBar。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有激活因子的神經(jīng)再生納米纖維的制備方法，其特征在于，步驟S5中，所述凍干的溫度為-30～-20℃，真空度為0.100～0.024mBar，凍干時(shí)間為3～5d。