[發明專利]一種通過電化學雙酶傳感器檢測毛油中PC含量的方法

有效

• 申請號: 201910873460.8
• 申請日: 2019-09-17
• 公開（公告）號: CN110455885A
• 公開（公告）日: 2019-11-15
• 發明（設計）人: 于殿宇;于長華;王旭;李丹;岳瑩雪;江連洲;王立琦;吳非;潘明喆
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種通過電化學雙酶傳感器檢測毛油中PC含量的方法。通過將膽堿氧化酶和辣根過氧化物酶固定在以MWCNTs/SnO₂/CS作為修飾材料的玻碳電極(GCE)上來制作雙酶GCE。在ChOx的添加量為2.5U、HRP的添加量為2.5U和pH為7.5的條件下，雙酶GCE對卵磷脂(PC)具有明顯的電化學響應，PC含量在10～300mg/L范圍內與峰電流呈線性關系，雙酶GCE的重現性RSD低于1％，保存45d后的雙酶GCE電流值仍為初始電流的93％，制備的雙酶GCE具有更好的重現性和穩定性，以期為快速檢測毛油中PC的含量提供理論基礎。

技術領域

本發明涉及一種電化學快速檢測領域，具體涉及一種通過電化學雙酶傳感器快速檢測毛油中PC含量的方法，即利用自制的電化學改性的雙酶玻碳電極傳感器對毛油中的PC進行高效快速的檢測。

背景技術

毛油是植物油中磷脂的含量最高的，而PC更是主要組成部分。油脂精煉加工過程中，如果脫膠不充分，達不到磷脂殘留的最低標準，會對剩余精煉工序會產生巨大影響，進而影響油脂的保質期并帶來一系列安全性問題。因此，檢測毛油中磷脂的含量尤為重要。

目前，磷脂的傳統檢測方法包括紫外可見光譜法、傅里葉變換近紅外光譜法、高效液相色譜法、薄層色譜法、核磁共振波譜法等。但這些檢測方法存在操作復雜、檢測時間長、成本高等缺點，因此檢測毛油中的磷脂應先從單一的PC入手，并逐步應用到含有多組分的毛油中。生物傳感器基于酶抑制，是檢測許多有毒化合物的可靠工具，食品中得到了廣泛應用。能夠彌補等傳統方法檢測費用高、速度慢等缺點，因而廣泛用于食品衛生安全性的檢測。電化學方法具有良好的再現性、操作穩定性和儲存穩定性，靈敏度好及檢測速度快、成本低等優點。在脂類快速檢測方面取得了廣泛應用。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種通過將ChOx和HRP固定在以MWCNTs/SnO2/CS作為電極修飾材料的GCE上，制備雙酶GCE傳感器，利用該傳感器可以對毛油中的PC進行高效快速的檢測，以期為快速檢測毛油中PC的含量提供理論基礎。

具體實施方式：

具體實施方式一：

用自制的電化學雙酶傳感器檢測毛油中PC含量的方法通過以下步驟實現：步驟一：自制的電化學雙酶傳感器。取0.15g殼聚糖(CS)粉末置于250mL的燒瓶中，加入濃度為0.3％的CS/乙酸透明溶液，用電動攪拌器攪拌30min，促使CS的充分溶解。2.5mg二氧化錫(SnO2)和5mg多壁碳納米管(MWCNTs)粉的混合物，加入到5mL的CS/乙酸透明溶液中，超聲處理60min，得到MWCNTs-SnO2-CS納米復合物，于4℃貯存備用；步驟二：制備含有100mg·L-1PC的PBS緩沖溶液為測試底液。將2.5U辣根過氧化物酶溶液滴涂到GCE表面，置于4℃下靜置干燥，待表面成薄膜狀時滴加5μL戊二醛于電極表面，37℃下交聯30min，然后用PBS緩沖液清洗電極表面。GCE上滴加10μL膽堿氧化酶，待表面成薄膜狀時滴加5μL戊二醛于電極表面，37℃下交聯30min，然后利用PBS緩沖液清洗電極的表面，N2吹干后得到雙酶GCE，將其儲存在4℃干燥的環境下備用；步驟三：在測試底液中，PC經PLD處理一段時間后獲得膽堿，膽堿在ChOx催化作用下生成H₂O₂，H₂O₂再被固定的HRP還原，進而氧化態的HRP與溶液中電子媒介體硫堇之間發生電子轉移，最終TH+在電極表面得到電子被還原，從而產生了還原電流，說明了雙酶GCE對PC具有明顯的電化學響應效果。

具體實施方式二：

本實施方式與具體實施方式一的不同點在于步驟一中加入濃度為1％的CS/乙酸透明溶液，其它步驟與具體實施方式一相同。

具體實施方式三：

本實施方式與具體實施方式一的不同點在于步驟二中交聯溫度為25℃，其它步驟與具體實施方式一相同。