[發明專利]一種基于HPLC/UPLC-QTOF-MS檢測骨碎補中多成分的方法

有效

• 申請號: 201910871226.1
• 申請日: 2019-09-16
• 公開（公告）號: CN110646528B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 張玉;張云天;翟燕娟;張宇靜;顧超;顧芹英
• 申請（專利權）人: 江陰天江藥業有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

本發明提供了一種基于HPLC/UPLC?QTOF?MS檢測骨碎補中多成分的方法，包括如下步驟：(1)取骨碎補樣品制成骨碎補粉末，精密稱定，然后與溶劑混合，稱定重量，超聲處理，搖勻，過濾，取續濾液，得到待測樣品；(2)用HPLC/UPLC分離步驟(1)中的待測樣品，然后用質譜檢測，得成分物質峰，用分析軟件對所述成分物質峰進行定性分析。本發明采用HPLC/UPLC?QTOF?MS技術對骨碎補中多成分進行檢測，該方法操作簡便、快速、準確、高效，實現了骨碎補中多成分的快速定性分析，對于提高骨碎補藥材的質量標準有重要意義。

技術領域

本發明涉及醫藥成分分析領域，具體涉及一種基于HPLC/UPLC-QTOF-MS檢測骨碎補中多成分的方法。

背景技術

骨碎補為水龍骨科植物槲蕨Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根莖，性溫、味苦，歸肝、腎經，具有強骨補腎、止痛續傷之功效。臨床主要用于筋骨折傷、腎虛腰痛、筋骨痿軟、耳鳴耳聾、牙齒松動等；外治斑禿、白癜風和外用消風祛斑等病癥。研究報道，其主要含有黃酮類、苯丙素類、酚酸類、三萜類、揮發油等多種活性成分，其中以柚皮苷代表的二氫黃酮類為骨碎補中主要成分(王鳳嬌,王婷婷,徐銘胡等.骨碎補化學成分及其對PC12細胞的保護作用研究[J].中國藥學雜志,2018,53(16):1359-1365)。現代藥理學研究骨碎補具有促增殖分化作用、抗骨質疏松作用、抗炎作用、促進骨折愈合、牙骨細胞保護作用、腎保護作用、防治藥物中毒性耳聾、降血脂等作用(李晉玉,趙學千,孫旗,等.骨碎補總黃酮的實驗及臨床研究概況[J].中國骨質疏松雜志,2018,24(10):1357-1364)。

由于骨碎補藥效物質基礎尚不明確，藥材的質量控制手段主要有傳統的生藥學研究(張炎兵,田軍明.骨碎補的生藥研究[J].中醫藥導報,2013,19(12):104,107)、以柚皮苷為對照的TLC法(韋國麟.劉華珍,蔡杰,等.藿草壯骨合劑中淫羊藿、骨碎補等薄層色譜鑒別方法的研究[J].按摩與康復醫學,2015,6(16):75-77)、HPLC指紋圖譜(劉珂弟,喬雪,梁永紅,等.骨碎補的HPLC指紋圖譜研究[J].中草藥,2011,42(3):510-514)、GC指紋圖譜(李曉紅,姜明燕,熊志立.骨碎補藥材脂溶性成分的氣相色譜指紋圖譜[J].山西醫藥雜志,2013,42(11):1211-1212)，含量測定方面多集中在幾種黃酮類的測定(王清華.HPLC-UV法測定燙骨碎補中柚皮苷的含量[J].宜春學院學報,2017,39(9):20-22；楊海玲,吳麗丹,謝鵬,等.HPLC法比較骨碎補不同炮制品中柚皮苷、5-羥甲基糠醛含量[J].中藥材,2016,39(11):2509-2512)，在《中國藥典》2015年版一部中，骨碎補項下采用柚皮苷進行TLC鑒別，以HPLC法測定柚皮苷的含量作為質控手段。這些技術手段和方法難以全面系統的表征化學成分輪廓特征和控制藥材的內在質量。傳統生藥學研究，有時候帶有一定的主觀性，在復雜的中藥材質量控制中有一定的局限性；而經典的TLC法中存在大量的假陽性和假陰性問題，易導致實驗結論的偏差；以HPLC為主的中藥指紋圖譜技術基于從整體面貌上辨認樣品的真實性，在中藥質量控制中發揮重要角色，但中藥材基原廣泛、中藥材受品種、產地、種植、采收、炮制等多種因素影響，難以控制，不同藥材其指紋圖譜有一定的差異，實驗室條件、儀器設備的不同也會影響指紋圖譜的重現性；GC-MS法更多的適用于含揮發性成分為主的中藥材質量控制的應用。

高效或超高效液相色譜法(HPLC或UPLC)分離效果好，分析速度快，非常適合多組分快速檢測，而四級桿串聯飛行時間質譜(Q-TOF)分辨率高、靈敏度高，結合同位素分析和高分辨的分子量，能夠實現分子量的精確測定，適合復雜基質中組分的檢測定性，因此HPLC/UPLC-QTOF-MS已成為復雜基質中多成分的有效快速準確的檢測手段，一種簡便、快速、準確、高效的對骨碎補進行全成分分析的方法亟待開發出來。

發明內容

發明要解決的問題