[發明專利]一種報告基因細胞株及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201910864683.8
• 申請日: 2019-09-12
• 公開（公告）號: CN110551756A
• 公開（公告）日: 2019-12-10
• 發明（設計）人: 李文英;甄瀅瀅;殷偉;邵喆;黃應峰
• 申請（專利權）人: 寶船生物醫藥科技(上海)有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/65;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 11332 北京品源專利代理有限公司
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種報告基因細胞株及其構建方法和應用，所述報告基因細胞株包含報告基因質粒，所述報告基因質粒包括STAT6信號響應元件；所述STAT6信號響應元件包括至少一個拷貝的STAT6結合基序；所述STAT6結合基序的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本發明報告基因細胞株適用于評價IL?4與其受體IL?4R的特異性結合，同時適用于IL?4/IL4Rα抗體阻斷IL?4其與IL?4Rα的結合，監測評估IL?4/IL4Rα抗體的活性，特異性顯著，檢測時間短，敏感度高，對監測評估單克隆抗體的活性具有重要意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種報告基因細胞株及其構建方法和應用。

背景技術

近年來，抗體藥物以其安全性、有效性和特異性等優點被廣泛應用于腫瘤、移植排異、細菌感染和自身免疫等多種疾病的臨床治療。在開發抗體藥物時，建立高效快速的抗體藥物篩選與評價系統是一個急需解決的問題。現階段，在體外水平評價抗體藥物活性主要采用抗原結合活性實驗和細胞增殖抑制實驗。抗原結合活性實驗雖然能夠直接反映抗原與抗體的結合能力，卻不能體現抗體藥物對細胞增殖的抑制作用；細胞增殖抑制實驗雖然直觀反映了抗體藥物對細胞增殖的抑制效果，但是實驗周期長，限制了其廣泛應用。Th2細胞通過分泌II型細胞因子IL-4、IL-5和IL-13，在II型炎癥通路中具有關鍵作用。IL-4可以促進Th細胞分化成為Th2細胞并增殖，Th2細胞進一步分泌產生IL-4、IL-5和IL-13；IL-5可以促進骨髓中嗜酸性粒細胞的分化，IL-4、IL-5和IL-13可以促使嗜酸性粒細胞轉移到特定的組織；IL-4和IL-13可以使B細胞產生IgE，IL-13在黏液分泌、杯狀細胞增生、平滑肌收縮和膠原產生等方面具有重要作用。

IL-4和IL-13雖然只有25％的氨基酸同源性，但是它們的受體復合物(I型受體和II型受體)包含共同的組成部分IL-4Rα，I型IL-4R指IL4Rα&commonγchain，II型IL-4R指IL4Rα&IL13Rα。IL-4通過結合I型受體和II型受體，激活下游JAK-STAT6通路發揮作用，而IL-13僅能通過II型受體發揮作用。IL-4和IL4Rα抗體藥物通過競爭性結合IL4/IL-4Rα，抑制IL-4與細胞表面IL-4Rα的結合。

目前，主要通過檢測IL-4/IL4Rα抗體藥物對TF-1細胞的增殖抑制活性，判斷抗體藥物的活性，盡管此方法能夠直接反映抗體藥物對細胞的作用，但是該方法耗時7天，易造成實驗結果失真。報告基因系統能夠特異性體現抗體藥物的作用機理，評價時間短，是良好的評價抗體藥物活性的方法，但現今市場上缺乏特異性評價IL-4/IL4Rα抗體藥物的報告基因細胞株。

CN107760760A公開了一種快速測定IL-6/IL-6受體抗體藥物生物學活性的方法，所述方法包括構建得到穩定表達SIE報告基因的效應細胞，用IL-6刺激激活報告基因表達，并用IL-6/IL-6R抗體藥物阻斷IL-6信號通路，根據測定的報告基因信號值擬合四參數曲線確定抗體生物學活性。本發明針對IL-6/IL-6R抗體藥物生物學活性測定建立了更加快速、準確的定量檢測方法，實驗周期短，操作簡便，并且避免了長時間孵育所帶來的細胞污染可能性等客觀因素的問題。然而，所述方法不能用于評價IL-4/IL4Rα抗體藥物的活性。

因此，提供一種特異性評價IL-4/IL4Rα抗體藥物的報告基因細胞株，用于評價IL-4/IL4Rα抗體藥物的生物學活性，具有廣闊的應用前景和巨大的市場價值。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種報告基因細胞株及其構建方法和應用，所述報告基因細胞株檢測時間短，敏感度高，對監測評估單克隆抗體的活性具有重要意義。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種報告基因質粒，所述報告基因質粒包括STAT6信號響應元件；

所述STAT6信號響應元件包括至少一個拷貝的STAT6結合基序；